Дифференцировка и созревание эмбриональных стволовых клеток человека в нейральные органоиды

Начните с человеческих эмбриональных стволовых клеток в культуральной среде.

Инкубация для пролиферации клеток и образования сфер.

Перенесите эти сферы в новую лунку со средой, содержащей факторы дифференцировки.

Инкубировать с легким встряхиванием. Факторы дифференцировки направляют стволовые клетки к нейронной линии.

Регулярно заменяйте половину среды.

Замените среду средой для нервной индукции, затем инкубируйте для получения нейронных предшественников.

Переключитесь на среду, богатую факторами роста, и инкубируйте, чтобы способствовать пролиферации клеток и образованию нейронных розеток.

Затем культивируют в среде, содержащей ингибиторы для блокирования нежелательной дифференцировки клеток.

Замените эту среду средой, содержащей факторы роста и ингибиторы. Инкубируйте для индуцировки дифференцировки в глиальные клетки и первичные нейроны.

Позже поместите нейронные розетки на гидрофобную мембрану в лунку, несущую вставки, содержащую богатую ингибиторами среду для созревания.

Инкубируйте без встряхивания, чтобы обеспечить созревание нервных и глиальных клеток на границе воздух-жидкость, образуя нейронные органоиды.

Дозирование 1 000 тысяч клеток на микролунку. Центрифугируйте клет