JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 3:13 мин • July 8th, 2025
Начните с крысы, находящейся под наркозом, продезинфицируйте ее бритую голову и закрепите в стереотаксическом аппарате.
Сделайте разрез по средней линии, чтобы обнажить череп.
Отметьте два положения на черепе и просверлите небольшие отверстия.
Присоедините к стереотаксическому аппарату шприц с химерными вирусами, содержащими экотропную РНК ВИЧ в лентивирусном векторе.
Вставьте иглу в отверстие, нацеливаясь на клетки коры головного мозга, включая микроглию, иммунные клетки мозга.
Медленно вводите вирусы для их равномерного распределения в коре головного мозга.
После инъекции зашить разрез, продезинфицировать область и дать крысе восстановиться.
Введенный вирус взаимодействует с рецепторами клеток мозга, сливается и высвобождает РНК ВИЧ в цитоплазму.
РНК обратно транскрибируется в ДНК и интегрируется в ДНК клетки.
Инфицированная клетка экспрессирует вирусные компоненты, продуцируя новые РНК и белки.
Они собираются и высвобождаются в виде новых вирусов, которые увеличивают вирусную нагрузку в мозге, создавая активную ВИЧ-инфекцию.
Для инъекции EcoHIV EGFP, после подтверждения отсутствия реакции на педальный рефлекс, сбривают волосы в области мозга и 2 раза стерилизуют открытые участки кожи 70% этанолом и скрабом на основе хлоргексидина. Закрепите крысу в положении лежа в стереотаксическом аппарате, и сделайте разрез шириной от 5 до 6 сантиметров через кожу головы по средней линии волосистой части головы.
Отметьте одну точку бурения на расстоянии 0,8 миллиметра в сторону и одну 1,2 миллиметра от брегмы и просверлите отверстие диаметром 0,4 миллиметра в каждой позиции черепа. Загрузите 1,04 умножить на 10 до шестой единицы трансдукции на миллилитр титрированного раствора EcoHIV Lentivirus в 10-микролитровый инъекционный шприц и закрепить шприц на стереотаксическом аппарате.
Переместите иглу близко к поверхности одного отверстия и введите иглу на 2,5 миллиметра в отверстие. Вливайте 1 микролитр вирусного раствора со скоростью 0,2 микролитра вируса в минуту. Когда весь вирус будет введен внутрь, оставьте иглу внутри области инъекции на пять минут, прежде чем медленно втянуть иглу, пока она не окажется за пределами черепа крысы.
Закройте разрез кожи швом из шелковой нити 4-0 и простерилизуйте раствор 70% этанолом. Затем поместите крысу в восстановительную камеру с грелкой с контролем до лежачего состояния.