Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:29 мин. • July 8th, 2025
Начните с чашки для культивирования, содержащей оплодотворенные эмбрионы рыбок данио в среде для эмбрионов.
Поместите чашку под стереомикроскоп и с помощью щипцов для рассечения удалите хорион, внешнюю оболочку, окружающую эмбрионы.
Это позволяет эмбрионам подвергаться воздействию окружающей среды.
Перенесите эти дехорионированные эмбрионы в чашку, содержащую эмбриональную среду с препаратом, который подавляет синтез холестерина, который имеет решающее значение для поддержания целостности кровеносных сосудов мозга.
Инкубируйте при контролируемой температуре до тех пор, пока эмбрионы не разовьются в личинки.
Со временем препарат проникает в развивающиеся личинки, подавляя синтез холестерина.
Дефицит холестерина ослабляет кровеносные сосуды мозга, вызывая их разрыв и утечку крови в мозг, развивая геморрагические пятна.
Понаблюдайте за личинками под стереомикроскопом.
Отделите геморрагических личинок с отчетливыми красными пятнами от негеморрагической популяции.
Перенесите этих геморрагических личинок в новую посуду для дальнейших исследований.
Через 24 часа после оплодотворения под светлопольным стереомикроскопом используйте острые ультратонкие щипцы для рассечения эмбрионов для дехорионации эмбрионов для лечения аторвастатином. Затем добавьте 30 миллилитров эмбриональной среды Е3 в две чистые чашки Петри, одну для лечения, а другую для контроля. Удалите 60 микролитров эмбриональной воды из лечебной чаши и добавьте 60 микролитров 0,5 миллимолярного аторвастатина, чтобы достичь 80% кровотечения личинок.
С помощью пастеровской пипетки перенесите 100 эмбрионов в как можно меньшем количестве воды в каждую чашку. Инкубируйте две чашки при температуре 28 градусов Цельсия. В любое время после 50 часов после оплодотворения под микроскопом используйте пастеровскую пипетку, чтобы тщательно отделить обескровленную рыбу от некровоточащих популяций и перенести личинок в новые блюда, содержащие свежие среды Е3.
Чтобы облегчить отделение личинок с положительным кровотечением, вы можете использовать рыбу без пигмента или рыбу, которая экспрессирует флуоресцентный белок в красных кровяных тельцах.