Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:27 мин. • July 8th, 2025
Возьмем первичные нейральные стволовые и прогениторные клетки и нейроны, которые имеют сиалогликопротеины, помеченные репортером сиаловой кислоты.
Добавьте параформальдегид для фиксации клеток. Удалите излишки параформальдегида с помощью буфера.
Инкубируйте с реакционной смесью, содержащей химические зонды на основе биотина, восстановитель и катализатор на основе металлов.
Восстановитель активирует катализатор, способствуя биотинилированию сиалогликопротеинов.
Удалите реакционную смесь и промойте буфером. Добавьте фторофор-конъюгированный стрептавидин для связывания биотинилированных сиалогликопротеинов.
Удалите несвязанный стрептавидин и промойте буфером. Добавьте белки и неионогенное моющее средство, чтобы блокировать неспецифические участки и проникать в клетки.
Удалите этот раствор и инкубируйте с первичными антителами, нацеленными на определенные клеточные белки.
Удалите несвязанные антитела.
Инкубируйте с меченными флуорофорами вторичными антителами и флуоресцентным красителем для связывания первичных антител, связанных с белками, и мечения ядер.
Удалите несвязанные молекулы. Постирайте с буфером.
С помощью флуоресцентной микроскопии визуализируйте клетки, чтобы визуализирова
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео