Оценка in vitro агрегированного амилоида-β коллапса колбочек роста нейронов

Начните с предметного стекла с несколькими лунками, содержащего нейроны эмбриона мыши в среде.

Нейроны демонстрируют конусы роста на концах своих растущих аксонов. Эти структуры включают в себя тонкие выступы, называемые филоподиями, и листовидные расширения, называемые ламеллоподиями, которые состоят из актиновых филаментов и микротрубочек, компонентов цитоскелета.

Обработайте тестовые лунки агрегированным белком амилоид-β или Aβ, а контрольные лунки - раствором носителя.

В тестовых лунках агрегированный Aβ связывается с мембранными рецепторами, инициируя нисходящую сигнализацию, которая фосфорилирует белки, регулирующие цитоскелет

.

Фосфорилированные белки разрушают актиновые филаменты и микротрубочки, дестабилизируя структурную целостность конуса роста и вызывая его коллапс.

Инкубируйте с фиксатором, чтобы сохранить клеточную структуру, затем промойте клетки и установите их для визуализации.

С помощью микроскопа сравнить ячеистые структуры в тестовой и контрольной лунках.

Повышенная частота коллапса конуса роста в обработанных Aβ нейронах указывает на токсическое действие агрегатов Aβ.

Начните этот анализ, по крайней мере, за неделю до его проведения, открыв свежий флакон с комме