Индуцирование травматического повреждения в срезе мозга с помощью устройства с электрошоковой трубкой

Начните с установки амортизаторной трубки, состоящей из проксимальной секции драйвера, мембранного затвора и секции с дистальным приводом с датчиками давления и держателем образца.

Устройство подключается к баллону с газом под давлением через блок управления.

Вставьте заглушку через держатель образца, чтобы выровнять ее с выходным отверстием амортизирующей трубки.

Прикрепите датчики давления к записывающему устройству.

Держите регулятор амортизатора закрытым и откройте выпускное отверстие газового баллона, чтобы создать давление в блоке управления.

Закрепите мембрану из полиэфирного листа в казенной части узла.

Поместите в держатель образца пакет, содержащий мембрану со срезами мозга в экспериментальной среде.

Откройте ручку управления газом на трубке амортизатора, позволяя газу попасть в водительскую секцию и увеличить давление воздуха.

При этом мембрана разрывается, высвобождая высокое давление, которое генерирует ударную волну.

Эта ударная волна распространяется и воздействует на срезы мозга, вызывая травматическое повреждение тканей.

С помощью заглушки прикрутите раму стерильного держателя пакета болтами к дистальному фланцу амортизаторной трубки, убедившись, что центральное отверстие совмещено с выходным отверстием амортизатора. Датчик 1, преобразователь давления расположен в средней части ведомой секции, а датчик 2 – в дистальном фланце ударной трубки.

Подключите эти преобразователи давления к осциллографу через блок питания источника тока и включите осциллограф. Убедитесь, что электромагнитный клапан амортизатора и регулятор расхода закрыты, затем откройте внешнюю линию сжатого воздуха и зарядите электромагнитный клапан до 2,5 бар. Откройте предохранительный клапан баллона со сжатым воздухом и медленно откройте регулятор давления, чтобы увеличить давление примерно до 5 бар.

Далее подготовьте диафрагмы, разрезав листы полиэстера толщиной 23 микрона на квадраты размером 10 на 10 сантиметров. Подготовьте ручки из автоклавного скотча и приклейте их к верхней и нижней части каждой диафрагмы. Поместите одну диафрагму в щель и убедитесь, что она отцентрирована.

Далее зажимаем диафрагму с помощью четырех болтов и гаек М24. Закрепите их последовательно диагонально симметричным образом, следя за тем, чтобы диафрагмы не мялись. Зажмите стерильный пакет в вертикальном положении на раме держателя, следя за тем, чтобы поверхность вкладыша для тканевой культуры с органотипическими срезами гиппокампа была обращена к выходному отверстию шоковой трубки, а вкладыш для тканевой культуры был центрирован внутри стерильного пакета.

В конфигурации с двойной мембраной давление разрыва зависит от разницы давления газов между драйвером и камерой с двойным затвором. Таким образом, чтобы мембраны лопнули контролируемым образом, предохранительный клапан с двойным затвором открывается вручную при достижении целевого давления.

Наденьте наушники и защитные очки, если вы еще не надеты. Закройте электромагнитный клапан. Включите блок питания источника тока, чтобы получить данные об ударной волне.

Манипулируйте ручкой регулировки потока на панели управления амортизаторной трубкой, чтобы медленно нагнетать давление в объемной секции амортизатора амортизаторной трубки для конфигурации с одной мембраной как для объемной секции динамика, так и для секции двойного затвора амортизаторной трубки для конфигурации с двойной мембраной. Как только мембрана разорвется, быстро закройте поток сжатого воздуха с помощью ручки подачи и откройте электромагнитный клапан.

Идеальная комбинация параметров ударной волны должна быть достаточной для повреждения тканей, но не настолько высокой, чтобы вызвать деформацию или разрыв вставки тканевой культуры или стерильного пакета.