Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:53 мин. • July 8th, 2025
Начните с покровного стекла, содержащего культивируемые нейроны, экспрессирующие белки мембраны синаптических везикул, включая синаптофизин с флуоресцентной меткой и синаптотагмин-1.
Удалите среду, добавьте смесь буфера для деполяризации и первичных антител, затем инкубируйте.
Буферные ионы поступают в клетки, стимулируя слияние синаптических везикул с мембраной, которая обнажает синаптотагмин-1.
Первичные антитела избирательно связываются с подвергшимся воздействию синаптотагмином-1.
Выбросьте буфер и промойте его средой, чтобы удалить несвязанные антитела.
Вводите свежую среду и инкубируйте для облегчения интернализации мембраны, образуя переработанные везикулы с меченым синаптофизином и связанным с антителами синаптотагмином-1.
Удалите среду, зафиксируйте ячейки, и промойте.
Введите блокирующий буфер на основе детергента с вторичными антителами, связанными с флуорофором.
Детергент проникает в клетки, позволяя вторичным антителам взаимодействовать с связанным с антителами синаптотагмином-1.
Поднимите покровное стекло, промойте его водой и высушите.
Поместите покровное стекло лицевой стороной вниз на предметное стекло с закладной средой для оптического анализа переработанных везик
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео