Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:25 мин. • July 8th, 2025
Начните с адгезивной культуры нейронов, обработанной альфа-синуклеином или альфа-S агрегатами, которые представляют собой сгустки неправильно свернутого белка.
Эти сгустки агрегируются в образовку внутриклеточных включений.
Замените носитель фиксирующим раствором, чтобы сохранить целостность клеток.
Удалите фиксирующий раствор и промойте буфером.
Далее добавьте поверхностно-активное вещество для проникновения в клеточную мембрану.
Удалите поверхностно-активное вещество и промойте буфером.
Введите блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител.
Теперь инкубируйте с первичными антителами, которые специфически связываются с альфа-S включениями и структурными белками.
Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.
Инкубируйте с флуоресцентно меченными вторичными антителами.
Удалите несвязанные антитела.
Добавьте флуоресцентный краситель, чтобы пометить ядро.
Удалите пятно и постирайте с буфером.
С помощью монтажного материала закрепите покровное стекло с нейронами на предметном стекле
.Под флуоресцентным микроскопом наблюдайте за иммуномечеными альфа-S включениями внутри нейрона.
Для проведения иммунофлюоресценции в химическом вытяжном шкафу фиксируют
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео