Создание мышиной модели нейропатии мелких волокон с использованием резинифератоксина

Начните с раствора резинифератоксина (RTX), высокоаффинного агониста рецептора TRPV1 — чувствительных к боли ионных каналов, экспрессируемых на сенсорных нейронах.

Возьмите взрослую мышь под наркозом и введите RTX внутрибрюшинно.

Препарат проникает в системный кровоток и достигает ганглиев дорсальных корешков (ДРГ) – скопления тел сенсорных нейронов, расположенных вблизи спинного мозга.

RTX пересекает гемато-нервный барьер и взаимодействует с сенсорными нейронами малого диаметра в DRG, которые в изобилии экспрессируют TRPV1.

Связывание RTX с TRPV1 активирует рецепторы, вызывая массовый приток ионов кальция в нейроны.

Внутриклеточный кальций активирует ферменты, которые разрушают фосфолипиды клеточных мембран, клеточные белки и ДНК, что в конечном итоге приводит к гибели нейронов.

Впоследствии начинают дегенерировать внутриэпидермальные нервные волокна (ИНФ), периферические окончания сенсорных нейронов малого диаметра, иннервирующих кожу.

Эта дегенерация IENF приводит к потере сенсорных входных данных от кожи, тем самым создавая модель нейропатии с малыми волокнами.

Для начала наденьте средства индивидуальной защиты и примите надлежащие меры предосторожности при изготовлении стокового раствора ресинифератоксина или RTX. Разведите одну аликвоту из 600 микролитров в физрастворе для эксперимента, а остальное разделите на 12-микролитровые аликвоты для хранения. Для подопытных мышей используйте восьминедельных взрослых самцов мышей ICR весом от 35 до 40 граммов. Введите однократную дозу раствора RTX внутрибрюшинно с помощью шприца для микроинъекций. Затем введите второй группе мышей такой же объем носителя, который будет служить в качестве контроля. После того, как вы сделаете все инъекции, поместите мышей в их домашние клетки и убедитесь, что у них есть свободный доступ к пище и воде.