Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:47 мин. • July 8th, 2025
Заполните стеклянный инъекционный капилляр раствором синтетических мономерных амилоидных пептидов, которые являются аномальными пептидами со свойствами, склонными к агрегации.
Вставьте капилляр в держатель для микроинъекций.
Одновременно поместите рыбку данио в чашку Петри, содержащую раствор анестетика.
После того, как рыба будет обезболиваена, держите ее сбоку щипцами, чтобы зафиксировать голову.
Сделайте небольшой разрез в черепе рыбы на стыке двух боковых пластин, чтобы получить доступ к богатому нейронами переднему мозгу.
Теперь вставьте капиллярную иглу через разрез и введите раствор амилоидного пептида в передний мозг.
Переложите рыбок данио в емкость для восстановления с циркуляцией воды.
Внутри переднего мозга амилоидные пептиды накапливаются рядом с нейронами.
Эти пептиды спонтанно неправильно сворачиваются, образуя бета-листы, и агрегируются вокруг нейронов, образуя токсичные амилоидные бляшки.
Эти бляшки повреждают нейроны и ухудшают передачу ими сигнала.
Это создает модель болезни Альцгеймера у рыбок данио-рерио, расстройства мозга, характеризующегося амилоидными бляшками.
Используйте иглосъемник с параметрами, изложенными в текстовом протоколе, для подготовки стеклянных инъекционных капилляров. Отрегулируйте настройку давления на источнике давления до 25 фунтов на квадратный дюйм. Затем на микроинжекторе установите давление удержания на 20 фунтов на квадратный дюйм, давление выброса на 10 фунтов на квадратный дюйм, значение периода на 2,5 и значение стробирования на 100 миллисекунд. Далее загрузите стеклянный капилляр раствором для инъекций.
Затем вставьте стеклянный капилляр в держатель микровпрыска и отрегулируйте угол впрыска до 45 градусов. Поместите одну рыбу в новую чашку Петри, наполненную раствором для обезболивания. Как только она будет обезболиваена, подержите рыбу щипцами и сориентируйте ее для инъекции. С помощью кончика иглы 30 калибра создайте разрез в черепе над тектумом зрительного нерва, где встречаются две боковые пластины. Используйте только кончик иглы, и не проникайте более чем на 1 миллиметр через череп.
Затем, продолжая держать рыбку, введите кончик стеклянного капилляра через место разреза. Ориентируйте кончик стеклянного капилляра в сторону конечного мозга под углом 45 градусов, затем введите 1 микролитр раствора. Поместите рыбу обратно в контейнер для транспортировки, пока она не восстановится. Затем подключите контейнер к регулярно циркулирующей воде для рыб, чтобы обеспечить оптимальное качество воды.