Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 5:05 мин. • July 8th, 2025
Начните с мыши, находящейся под наркозом, с обнаженным черепом. Мышь закреплена в стереотаксической раме, содержащей шприц, предварительно заполненный склонными к агрегации бета-амилоидными белками.
Отметьте брегму, ключевую точку отсчета для определения координат инфузии белка.
Переместите шприц и коснитесь брегмы, а затем лямбды, чтобы определить дорсально-вентральные координаты, обеспечив точную глубину иглы.
Переместите шприц выше заданной медиально-латеральной координаты, нацеливаясь на зубчатую извилину, имеющую решающее значение для обработки памяти.
Коснитесь поверхности черепа, убедившись, что дорсально-вентральная координата находится в пределах допустимого значения, и отметьте ее. Повторите эту процедуру с обратной стороны.
Просверлите в отмеченной медиально-латеральной координате, введите белки бета-амилоида в зубчатую извилину и удерживайте, чтобы предотвратить обратный поток.
Просверлите и введите бета-амилоидные белки с противоположной стороны для равномерного диспергирования белка.
Отсоедините ушные планки от мыши, затем зашите разрез.
Со временем бета-амилоидные белки агрегируются, образуя бляшки, которые разрушают зубчатые нейроны извилины и нарушают обработку памяти, что приводит к болезни Альцгеймера.
Сделайте скальпелем разрез размером от 2 до 3 миллиметров по средней линии кожи головы. С помощью прямых тонких ножниц удлините линию разреза примерно на 1,0 сантиметра, чтобы обнажить сагиттальный шов, брегму и лямбду черепа. После этого с помощью щипцов раздвиньте кожу.
Очистите череп стерильным ватным тампоном, смоченным в стерильном физрастворе. Затем используйте чистый сухой ватный тампон, чтобы высушить череп. Далее отметьте точку на брегме. Расположите шприц Гамильтона с помощью микроманипулятора так, чтобы кончик иглы просто касался точки на брегме. Затем запишите координату DV.
Отметьте точку на лямбда-точке. Убедитесь, что ось AP черепа находится на одном уровне, переместив шприц кзади к точке лямбда. Кончик иглы должен касаться точки лямбда так же, как она касалась точки брегмы. После этого запишите положение DV. Координаты DV для брегмы и лямбды должны быть в пределах 0,5 миллиметра.
Теперь верните кончик иглы в точку брегмы. Запишите начальное положение точки доступа. Затем рассчитайте конечное положение ТД, вычтя 2 миллиметра из начальной координаты ТД, и переместите иглу шприца в положение конечной ТД.
Затем запишите текущую координату ML. Вычислите левую и правую конечные координаты ML, прибавив или вычтя 1,3 миллиметра от начальной координаты ML, и переместите иглу шприца к конечным координатам ML. Прикоснитесь кончиком иглы к поверхности черепа на обоих концах координат ML и убедитесь, что координаты DV находятся в пределах 0,5 миллиметра.
Находясь в конце ML координаты, потяните иглу вверх на 0,5 – 1 сантиметр над черепом. Отметьте точку на черепе темным маркером с экстратонкой точкой. Повторите этот шаг для контралатеральной стороны черепа. Затем отодвиньте шприц в сторону.
Просверлите отверстие слева или справа по координате ML на черепе с помощью сверла диаметром 0,8 миллиметра. Повторите этот шаг для контралатеральной стороны. После этого переместите шприц к одному из вновь введенных отверстий. Опустите иглу прямо за череп и будьте осторожны, чтобы не проколоть мозг.
Чтобы убедиться, что игла прошла через череп, осторожно прижмите иглу к черепу, чтобы убедиться, что игла не выйдет из отверстия. Затем запишите начальную координату DV. Вычислите конечную координату DV, вычтя 2,2 миллиметра из начальной координаты DV, и опустите иглу до конечной координаты DV.
Затем настройте стереотаксический инжекторный насос на закачку 4 микролитров Aβ1-42 в зубчатую извилину со скоростью 0,5 микролитра в минуту. После инфузии дайте игле оставаться на месте еще на минуту, чтобы свести к минимуму обратный поток раствора из места инъекции. После этого переместите иглу на другую сторону мозга и повторите процедуру.
Теперь открутите ушные планки. Используйте щипцы студенческого стандартного образца, чтобы стянуть кожу головы и запечатать рану швом. Снимите носовой щиток и снимите мышь.