Иммунофлуоресцентное окрашивание популяций нейронов в желудочно-кишечном тракте эмбрионов мышей

Возьмите неподвижный, трансгенный эмбрион желудочно-кишечного тракта мыши на желаемой стадии развития.

Энтеральная нервная система желудочно-кишечного тракта включает в себя энтеральные нейроны и холинергические нейроны, экспрессирующие холинацетилтрансферазу.

Эти холинергические нейроны также экспрессируют флуоресцентный белок, движимый промотором холинацетилтрансферазы.

Инкубируйте тракт с неионогенным детергентом и белками для проникновения клеток и предотвращения связывания неспецифических антител.

Замените на первичные антитела. Инкубируйте антитела, чтобы связать свои целевые белки в нейронах соответственно.

Удалите несвязанные антитела и промойте буфером.

Инкубируйте с флуорофор-конъюгированными вторичными антителами для специфического связывания первичных антител, связанных с белками-мишенями.

Удалите излишки антител и промойте буфером.

Погрузите меченый тракт в монтажную среду, содержащую ядерный краситель для окрашивания ядер. Теперь установите покровную крышку.

С помощью конфокальной микроскопии визуализировать и проанализировать распределение холинергических нейронов в желудочно-кишечном тракте.

Поместите желудочно-кишечные тракты в 0,2-миллилитровую трубку, содержащую