Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:12 мин. • July 8th, 2025
Расположите трансгенную мышь в дорсальном положении. Мышь экспрессирует мутировавшую форму белка альфа-синуклеина, который склонен к агрегации.
Принимают суспензию альфа-синуклеиновых фибрилл, агрегаты неправильно свернутого белка альфа-синуклеина.
Введите фибриллы в брюшную полость, чтобы обеспечить их системное распределение.
Попадая в кровоток, фибриллы достигают центральной нервной системы и связываются с эндотелиальными клетками гематоэнцефалического барьера.
Фибриллы транспортируются через везикулы через клетки и попадают в нервную ткань. Затем они проникают в нейроны через эндоцитоз и способствуют агрегации мутировавших белков альфа-синуклеина.
Эти агрегаты высвобождаются в результате экзоцитоза и распространяются на соседние нейроны, микроглии и астроциты.
Распознавание агрегатов заставляет микроглию выделять активные формы кислорода, которые повреждают ткани, и цитокины, которые привлекают дополнительные иммунные клетки. Это приводит к нейровоспалению, которое приводит к гибели нервных клеток.
Дайте мышке восстановиться для оценки нейровоспаления, опосредованного альфа-синуклеином.
Для внутрибрюшинных инъекций кратковременно одурманить животных изофлураном в анестезиологической камере. Снова ущипните палец ноги животного и убедитесь, что оно не отводит заднюю конечность, чтобы обеспечить надлежащую анестезию. Наполните одноразовый шприц для подкожных инъекций 27-го калибра 50 микролитрами ультразвукированных альфа-синуклеиновых фибрилл или PBS.
Держите животное в спинном положении, головой от следователя и вниз примерно под углом 45 градусов. Непосредственно вводите в брюшину мыши, не проникая в тонкую кишку или слепую кишку, расположенную за брюшной стенкой. Наблюдайте за животными до тех пор, пока они не оправятся от анестезии.