Покадровая визуализация для мониторинга трансцеллюлярного распространения прионоподобных белков у трансгенных нематод

Возьмем, к примеру, трансгенных нематод, которые поддерживаются на той же стадии развития.

Мышечные клетки стенки тела этих нематод экспрессируют прионоподобные белки, которые помечены красным флуоресцентным белком и локализованы в кислых везикулах.

Прионоподобные белки представляют собой неправильно свернутые, агрегирующие белки, которые связаны с нейродегенеративными заболеваниями.

Далее перенесите нематоды на агарозную прокладку, содержащую полимерные наночастицы и раствор анестетика.

Совместное воздействие наночастиц и раствора анестетика иммобилизует нематод на агарозной подушечке.

Наденьте покровную крышку на агарозную подушечку и закройте ее.

Теперь поместите узел агарозной прокладки с нематодами под конфокальный микроскоп и установите соответствующие параметры визуализации.

Получение покадровых изображений флуоресцентных меток белков внутри нематод для мониторинга везикулярного транспорта прионоподобных белков внутри и между мышечными клетками стенки тела.

После приготовления синхронизированных трансгенных линий контроля и прионного домена C. elegans, а также 10% агарозных прокладок в соответствии с сопроводительным текстовым протоколом, пипетку 3 микролитра 100 нанограмм п