Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 5:36 мин. • July 8th, 2025
Начните с замороженного посмертного образца ткани человеческого мозга из подтвержденного случая нейродегенеративного заболевания.
Акцизирует серое вещество, богатое нерастворимыми белковыми агрегатами, являющимися отличительным признаком заболевания.
Переложите ткань в гомогенизатор.
Добавьте буфер, содержащий ингибиторы, и гомогенизируйте для высвобождения внутриклеточных компонентов.
Ингибиторы блокируют ферменты протеазы и фосфатазы, предотвращая деградацию белка.
Переложите гомогенат в пробирку и добавьте ионный буфер для детергента. Инкубировать.
Детергент растворяет нативно свернутые белки, в то время как неправильно свернутые белковые агрегаты остаются нетронутыми.
Ультразвуком до полной клеточной диссоциации.
Переложите гомогенат в ультрацентрифужную пробирку и центрифугуйте на высокой скорости.
Агрегаты оседают на дне.
Удалите надосадочную жидкость, содержащую растворимые в моющих средствах белки.
Промойте агрегаты ионным моющим буфером, центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость.
Добавьте буфер мочевины, чтобы денатурировать белковые агрегаты, делая их растворимыми.
Переложите солюбилизированные белковые агрегаты в пробирку и кратковременно обработайте ультразвуком,
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео