Оценка моторной функции на экспериментальной модели мышей с аутоиммунным невритом

Поместите мышь на беговую дорожку, чтобы записать ее движения при беге, оценив ее двигательную функцию, которая представляет собой способность управлять движениями тела.

После теста введите коклюшный токсин в брюшную полость мыши, находящейся под наркозом, чтобы ослабить ее гемато-нервный барьер.

Далее удалите шерсть между лопатками мыши, продезинфицируйте область и введите в подкожную клетчатку пептиды, имитирующие миелин, с адъювантом.

Повторите обе инъекции для достижения оптимальных реакций.

Пептиды стимулируют антигенпрезентирующие клетки, которые мигрируют в лимфатические узлы и продуцируют аутореактивные Т-клетки.

Эти Т-клетки попадают в кровоток, пересекают нарушенный гемато-нервный барьер и нацелены на периферические нервы, что приводит к высвобождению цитокинов.

Это привлекает макрофаги и В-клетки, которые высвобождают эффекторные молекулы, разрушающие миелиновую оболочку.

Распад миелина нарушает передачу нервных сигналов и приводит к возникновению экспериментального аутоиммунного неврита или EAN.

Наконец, повторите тест на беговой дорожке. Мышь демонстрирует трудности при беге и координации движений конечностей, что указывает на двигательную дисфункцию.

За три дня до индукции заболевания включите аппарат для оценки двигательных функций и включите световую кнопку. Возьмите мышку в руки и опустите ее на емкость с красным пищевым красителем. Поместите мышь в прогулочный отсек и установите скорость беговой дорожки на 15 сантиметров в секунду. Включите беговую дорожку и нажмите «запись», чтобы использовать систему визуализации функции ходьбы для фиксации беговых движений мыши в течение 36 секунд.

Через 36 секунд остановите запись и беговую дорожку, а также сохраните видеофайл тренировочного забега в указанную папку.

За день до первой иммунизации с помощью шприца объемом 0,5 миллилитра с иглой калибра 30_1/2 введите 1,6 микрограмма на миллилитр коклюшного токсина в 250 микролитрах изотонического PBS IP, находящегося под наркозом шести-восьминедельного самца C57 black 6

На следующий день соедините равные объемы свежеприготовленных растворов пептида в 0,9% физрастворе и 20 миллиграммов на миллилитр микобактерии туберкулеза в полном адъюванте Фрейнда в венчике для бусин, и перемешайте растворы на максимальной скорости в течение 1 минуты при комнатной температуре.

Загрузите инокулюм в шприц, оснащенный иглой 23 калибра, а затем переверните и встряхните шприц перед тем, как выпустить воздух из шахты шприца.

Перед введением инокулята удалите волосы латерально по отношению к средней линии между лопатками и продезинфицируйте открытые участки кожи 70% этанолом.

Затем с помощью щипцов Аддисона захватите кожу и введите 50 микролитров раствора мыши, которой вводят коклюшный токсин, путем подкожной инъекции.

На следующее утро введите 1,2 микрограмма на миллилитр коклюшного токсина в 250 микролитрах PBS IP, как только что было продемонстрировано, а затем еще 1,2 микрограмма на миллилитр коклюшного токсина IP через 48 часов.

Через три дня, после третьей инъекции коклюша, введите еще 50 микролитров свежеприготовленного инокулюма в то же место инъекции, что и раньше, и контролируйте клинический балл и двигательную функцию животных два раза в неделю до конца эксперимента.