Создание корковой ножевой травмы у мышиной модели для индуцирования реактивного астроглиоза

Закрепите мышь под наркозом в стереотаксической рамке.

Побрейте ему голову и продезинфицируйте участок. Наносите глазную мазь, чтобы предотвратить высыхание роговицы.

Сделайте надрез, чтобы обнажить череп.

Удалите вышележащие мембраны и очистите поверхность физиологическим раствором.

Отметьте область на черепе, нацеливаясь на кору головного мозга.

Пробурьте вдоль отмеченной области. Применяйте физиологический раствор для поддержания увлажненности тканей.

Удалите ослабленный кусочек кости, обнажив нижележащую кору.

Поместите пропитанную солевым раствором гелевую пену, чтобы предотвратить пересыхание тканей и впитать кровь.

Расположите стерильное лезвие, прикрепленное к держателю зонда, над корой головного мозга. Затем снимите гелевую пену.

Опустите лезвие, чтобы проникнуть в кору головного мозга, и перемещайте его горизонтально повторяющимися движениями, чтобы создать механическую травму.

Снимите лезвие и используйте гелевую пену для впитывания крови. Зашить хирургический разрез.

В месте повреждения астроциты подвергаются реактивному глиозу, где они активируются и размножаются, высвобождая защитные молекулы, которые уменьшают воспаление и способствуют восстановлению тканей.

На этом шаге поместите полностью успокоенную мышь в стереотаксическую рамку. Закрепите его носом в носовом конусе, который соединен с изофлураном. Далее затяните ушные планки и убедитесь, что голова устойчива.

Брейте голову от уровня глаз до уровня ушей. Затем простерилизуйте кожу тремя чередующимися скрабами изопропилового спирта и раствора бетадина йода. После этого нанесите мазь на оба глаза, чтобы предотвратить их высыхание.

Следите за глубиной анестезии животного, зажимая его палец на ноге или хвосте. Мышь находится в соответствующей операционной плоскости, когда нет ответа и дыхание медленное и равномерное. Сделайте парасагиттальный разрез кожи сразу за глазами почти до точки между ушами одним сплошным надрезом. Отодвиньте кожу в сторону и обрежьте правую сторону гемостатом.

Под микроскопом очистите вышележащую мембрану на черепе с помощью тупой стороны скальпеля и аппликаторов с ватным наконечником. Затем очистите череп аппликатором с ватным наконечником, смоченным в 0,9% физиологическом растворе, и дайте ему полностью высохнуть. С помощью небольшой линейки и постоянного маркера отметьте переднюю границу трепанации черепа на расстоянии 1 миллиметра каудально от коронкового шва, а затем отметьте левый край трепанации черепа на расстоянии 1 миллиметра латерально от сагиттального шва.

Далее отметьте правую и каудальную границы трепанации черепа на расстоянии 4 миллиметров от сагиттального и коронального швов соответственно. С помощью сверла 0,5 тщательно просверлите контур перманентного маркера и следите за тем, чтобы не пробить череп полностью. Аккуратно надавите щипцами на изолированный кусок теменной кости. Истонченная кость готова к удалению, когда она достаточно слаба по периметру.

Теперь, используя 10-миллилитровый шприц с иглой 23-го калибра, нанесите небольшое количество 0,9% физиологического раствора на изолированную кость и просверленную область. Присоедините руку манипулятора к стереотаксическому аппарату. Затем прикрепите новое лезвие скальпеля к держателю щупа острой стороной рострально.

Не мешая руке манипулятора, осторожно приподнимите костный кусок с помощью пары угловых щипцов, вставив наконечник в боковую часть кости и оттянув его одним движением. Затем поместите небольшой кусочек смоченной рассасывающейся гелевой пены на открытый мозг, чтобы предотвратить его высыхание и впитать кровь, которая может присутствовать. После того, как гелевая пена будет помещена на мозг, поверните руку манипулятора на место. Отрегулируйте лезвие так, чтобы оно располагалось по центру гелевой пены.

Затем снимите гелевую пену, и опустите лезвие до тех пор, пока кончик не коснется твердой мозговой оболочки, не прокалывая ее. Отметьте дорсально-вентральные координаты с помощью шкалы нониуса на вертикальном плече стереотаксической рамы. Далее, используя руку-манипулятор, медленно опустите лезвие ровно на 3 миллиметра в мозг. Оставьте лезвие на месте в течение 5–10 секунд.

Затем медленно переместите стереотаксическую руку с лезвием в рострально-каудальном направлении три раза. Позвольте лезвию достичь ростральной и каудальной границ трепанации черепа, прежде чем переходить к противоположному концу. После этого медленно поднимите стереотаксическую руку и извлеките лезвие из мозга.

Немедленно положите еще один кусочек гелевой пены на поверхность мозга, чтобы впитать лишнюю кровь или жидкость. Тем временем снимите стереотаксическую руку и утилизируйте лезвие скальпеля. Как только кровотечение остановится, удалите гелевую пену.

Закройте рану, зашив кожу нерассасывающимися швами, такими как Ethilon или Prolene, и снимите швы через 9-10 дней после операции. Далее введите от 0,5 до 1 миллилитра раствора лактата Рингера подкожно, чтобы обеспечить увлажнение.