Оценка бактериальной колонизации в мозге мыши после инфекции Listeria monocytogenes

Возьмем перфузированный мозг мыши в буфере.

Мозг инфицирован стрептомицин-резистентной Listeria monocytogenes, патогенной бактерией.

На этапе перфузии кровь удаляется из мозга, что гарантирует, что измерения бактериальной нагрузки отражают нагрузку Listeria monocytogenes в ткани.

Затем гомогенизируйте мозг с помощью стерилизованного гомогенизатора, чтобы разрушить ткань и выпустить бактерии.

Теперь приготовьте серийные разведения гомогената мозга с использованием буфера.

Нанесите эти разведения на мозговую инфузию сердца в агаровых тарелках, содержащих стрептомицин, антибиотик.

Инкубируйте пластины. Инфузионный агар для мозгового сердца обеспечивает питательные вещества для роста Listeria monocytogenes, в то время как стрептомицин отбирает устойчивые бактерии, позволяя образовываться только резистентным к стрептомицину колониям листерий.

Подсчитайте количество колоний на пластине, чтобы определить колониеобразующие единицы, которые являются мерой жизнеспособной инфекционной бактериальной нагрузки в мозге.

С помощью щипцов вскройте череп, чтобы обнажить мозг, и поместите шпатель между нижней стороной мозга и основанием черепа, чтобы аккуратно перенести мозг в 15-миллилитровую трубку