Cre-LoxP опосредованная индукция церебральных кавернозных мальформаций у мышиной модели

Начнем с генетически модифицированного мышиного щенка, несущего ген CCM2, который необходим для стабильности кровеносных сосудов.

Этот ген окружен двумя сайтами loxP. Эндотелиальные клетки детеныша также экспрессируют фермент Crecombinase, слитый с рецептором эстрогена или ER.

Внутрижелудочно введите щенку 4-гидрокситамоксифен или 4-НТ.

4-HT диффундирует через эндотелиальные клетки и связывается с эстрогеновой рецепторной частью гибридного белка Cre-ER.

Это связывание вызывает конформационное изменение, которое активирует Cre-рекомбиназу, которая проникает в ядро эндотелиальных клеток и связывается с сайтами loxP.

Это облегчает рекомбинацию между сайтами loxP, образуя петлю и иссекая сегмент гена CCM2.

Потеря CCM2 нарушает целостность эндотелиальных клеток, ставя под угрозу стабильность стенок кровеносных сосудов.

Это приводит к развитию опухших аномальных сосудистых структур, известных как церебральные кавернозные мальформации или КМК, которые являются хрупкими и склонными к утечке.

Начните с растворения 4-HT в 100% этаноле до концентрации 10 миллиграммов на миллилитр. Подготовьте 30 микролитров аликвот, а затем храните при температуре минус 80 градусов Цельсия. В день применения разведите аликвотированный 4-HT в кукурузном масле до 0,5 миллиграмм на миллилитр. Затем с помощью инсулинового шприца введите 50 микролитров 4-HT внутрижелудочно новорожденным детенышам P1, чтобы вызвать экспериментальные поражения CCM.