Изучение накопления альфа-синуклеина в первичных эмбриональных дофаминовых нейронах мышей

Возьмите микроостровные культуры первичных эмбриональных дофаминовых нейронов мыши в многолуночном планшете, содержащем среду.

Эти нейроны предварительно обрабатываются предварительно сформированными фибриллами (PFF) — неправильно свернутыми и агрегированными формами белка альфа-синуклеина.

PFF действуют как семена, вызывая дальнейшее неправильное сворачивание и олигомеризацию эндогенного альфа-синуклеина, образуя фосфорилированные фибриллы альфа-синуклеина. Эти фибриллы со временем образуют тельца Леви.

Замените среду фиксатором для сохранения клеточной морфологии.

Промойте ячейки буфером.

Введите буфер, содержащий детергент, для проникновения в клеточные мембраны.

Добавьте блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител.

Добавьте первичные антитела, нацеленные на фосфорилированный альфа-синуклеин, и референсный белок, повсеместно экспрессируемый в дофаминовых нейронах.

Промойте, чтобы удалить несвязанные антитела.

Введение флуорконъюгированных вторичных антител, нацеленных на соответствующие первичные антитела.

Промойте еще раз, чтобы удалить несвязанные антитела.

Добавьте ДНК-связывающий краситель для окрашивания ядер.

С помощью сканера флуоресцентных п