Получение клеточных суспензий из ишемизированных тканей мозга мышей

0 просмотров3:47 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Принимайте перфузированные ишемизированные ткани мозга мыши, содержащие клетки мозга и инфильтрированные иммунные клетки.

Пропустите салфетки через ситечко и промойте буфером.

Центрифугируйте фильтрат и выбросьте надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте гранулу в растворе пищеварительного фермента и переложите ее в микроцентрифужную пробирку.

Инкубируйте пищеварительные ферменты, чтобы расщепить внеклеточный матрикс, разрыхляя клетки.

Отфильтруйте суспензию и промойте буфером, содержащим ДНКазу, чтобы удалить загрязняющую ДНК.

Затем промойте буфером, не содержащим DNase.

Центрифугируйте фильтрат и выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте клетки в среде с градиентом плотности. Затем переложите содержимое в свежую пробирку и перемешайте. Центрифуга для разделения компонентов по плотности.

Удалите надосадочную жидкость, содержащую миелин и мусор.

Ресуспендируйте гранулу в буфере, не содержащем ДНКазы. Переложите его в новую пробирку и снова центрифугите.

Выбросьте надосадочную жидкость, чтобы обеспечить достаточное удаление градиента плотности среды.

Наконец, снова суспендируйте ячейки в буфере для дальнейшего анализа.

С помощью поршневого конца 5-миллилитрового шприца разомните кусочки мозговой ткани через 100-микронный клеточный фильтр, непрерывно промывая фильтр ледяным HBSS с кальцием и магнием. Затем поместите гомогенизированные ткани на лед.

Когда все образцы будут обработаны, раскрутите клеточные суспензии. И аккуратно отбраковывайте надосадочную жидкость. Суспендируйте гранулы в 1 миллилитр буфера для метантенка. Затем переложите клеточную суспензию в 2-миллилитровую пробирку.

И инкубируйте клетки при медленном непрерывном вращении при температуре 37 градусов Цельсия. Через час просейте клеточную суспензию через сетчатое фильтр с плотностью 70 микрон. И тщательно промойте фильтр 3 миллилитрами промывочного буфера, содержащего ДНКазу. Затем промойте ситечко 15 миллилитрами буфера для стирки, не содержащего ДНКазы. Раскрутите клетки вниз и выбросьте надосадочную жидкость.

Чтобы удалить клеточный мусор и миелин, повторно суспендируйте клетки в 5 миллилитров среды с градиентом плотности 25% комнатной температуры и переложите клеточную суспензию в 15-миллилитровую пробирку. Тщательно перемешайте ячейки и градиент с помощью многократного аккуратного пипетирования. Затем раскрутите клеточный раствор.

По окончании сепарации осторожно аспирируйте миелиновую оболочку и надосадочную жидкость, не нарушая гранулы. И ресуспендируйте клетки в 10 миллилитрах буфера для промывки, не содержащего ДНКазы. Переложите ячейки в 15-миллилитровую трубку и снова раскрутите их, повторно суспензив гранулу в 100 микролитрах холодного буфера для промывки.

12:52

Выделение и проточной цитометрии анализ глиомы инфильтрирующие мононуклеарных клеток периферической крови

Похожие видео

0 Просмотры

12:34

Анализ иммунокомпетентных клеток в одном седалищного нервов и спинной корень ганглия от одной мыши с помощью проточной цитометрии

Похожие видео

0 Просмотры

09:55

Выделение и характеристика иммунных клеток из микрорасчлененных мышиных сосудисто-мозговых сплетений

Похожие видео

0 Просмотры

04:20

Изоляция сосудов мозга мыши: протокол выделения неповрежденных сосудов из образца мозга мыши

Похожие видео

0 Просмотры

03:48

Выделение микроглии из коры головного мозга взрослой мыши

Похожие видео

0 Просмотры

06:18

Выделение инфильтрирующих опухоль иммунных клеток из головного мозга мышей

Похожие видео

0 Просмотры

05:43

Выделение и культивирование перицитов головного мозга мышей

Похожие видео

0 Просмотры

03:27

Выделение нескольких типов клеток из мозга мыши путем механической гомогенизации

Похожие видео

0 Просмотры

12:42

Стереологический и проточной цитометрии Характеристика субпопуляций лейкоцитов в моделях переходных или Постоянного церебральной ишемии

Похожие видео

0 Просмотры

12:14

Выделение и проточной цитометрии анализ иммунных клеток из мозга ишемического Mouse

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026