Получение клеточных суспензий из ишемизированных тканей мозга мышей

Принимайте перфузированные ишемизированные ткани мозга мыши, содержащие клетки мозга и инфильтрированные иммунные клетки.

Пропустите салфетки через ситечко и промойте буфером.

Центрифугируйте фильтрат и выбросьте надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте гранулу в растворе пищеварительного фермента и переложите ее в микроцентрифужную пробирку.

Инкубируйте пищеварительные ферменты, чтобы расщепить внеклеточный матрикс, разрыхляя клетки.

Отфильтруйте суспензию и промойте буфером, содержащим ДНКазу, чтобы удалить загрязняющую ДНК.

Затем промойте буфером, не содержащим DNase.

Центрифугируйте фильтрат и выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте клетки в среде с градиентом плотности. Затем переложите содержимое в свежую пробирку и перемешайте. Центрифуга для разделения компонентов по плотности.

Удалите надосадочную жидкость, содержащую миелин и мусор.

Ресуспендируйте гранулу в буфере, не содержащем ДНКазы. Переложите его в новую пробирку и снова центрифугите.

Выбросьте надосадочную жидкость, чтобы обеспечить достаточное удаление градиента плотности среды.

Наконец, снова суспендируйте ячейки в буфере для дальнейшего анализа.

С помощью поршневого конца 5-миллилитрового шприца ра