Создание мышиной модели фокальной демиелинизации с помощью двухточечной инъекции лизофосфатидилхолина

Начните с мыши, находящейся под наркозом, закрепленной в стереотаксическом аппарате с бритой головой.

Продезинфицируйте кожу головы и сделайте разрез, чтобы обнажить череп.

Очистите череп, чтобы удалить слой соединительной ткани.

Используя точку отсчета на черепе, отметьте целевое место и просверлите отверстие.

Возьмите шприц, содержащий раствор лизофосфатидилхолина, или ЛПК, закрепленный на стереотаксическом аппарате.

Определите координаты двух точек инъекции в области белого вещества мозга и расположите шприц соответствующим образом.

Введите раствор LPC и удерживайте иглу на месте в течение некоторого времени после инъекции в каждом месте.

Зашите разрез и дайте животному восстановиться.

В месте инъекции ЛПК взаимодействует непосредственно с миелином, нарушая его структуру и вызывая его распад.

Это вызывает локальную нейрональную дисфункцию, тем самым создавая модель фокальной демиелинизации.

Начните с подсоединения иглы 32-го калибра к пятилитровому шприцу. Отведите 5 микролитров раствора ЛПЦ для приготовления инъекции. Далее подтвердите глубину обезболивания мыши отсутствием рефлекса пальцев ног, при этом дыхание плавное. Расположите мышь в стереотаксической рамке тыльной стороной вверх и закрепите голову носовым конусом и зубным зажимом.

Закрепите мышь на стереотаксическом аппарате с помощью двусторонних ушных вкладышей. Убедитесь, что ушные планки находятся на одном уровне, а голова находится горизонтально и устойчиво. Продезинфицируйте кожу головы, протерев йодофором. Затем с помощью скальпеля разрежьте небольшой разрез примерно на 1,5 сантиметра по средней линии кожи головы, чтобы обнажить череп. Протрите череп ватным тампоном, смоченным в 1% перекиси водорода, пока не обнажатся брегма, лямбда и задний родничок.

Поместите шприц на стереотаксический аппарат. Обеспечьте горизонтальное положение тела животного и его местонахождение. Как только место инъекции будет определено, запишите координаты и сделайте отметку маркером на черепе. Аккуратно просверлите отмеченное место сверлом для черепа. Следите за тем, чтобы избежать кровотечения.

Медленно перемещаем иглу в заданные координаты. Чтобы вызвать демиелинизацию мозолистого тела, вводите 2 микролитра раствора LPC в каждое место инъекции со скоростью 0,4 микролитра в минуту. После инъекции подержите иглу в каждом месте еще 10 минут. Наконец, зашите кожу швом 4-0 и подождите, пока животное проснется в течение 10 минут.