Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:51 мин. • July 8th, 2025
Закрепите щенка крысы под наркозом на стереотаксической рамке. Продезинфицируйте голову и сделайте надрез, чтобы обнажить череп.
Определите брегму, анатомический ориентир, чтобы определить местоположение боковых желудочков, полостей в головном мозге, заполненных спинномозговой жидкостью.
Эпителиальные клетки сосудистого сплетения и эпендимальные клетки выстилают желудочки, образуя барьер из перивентрикулярного пространства.
С помощью микрошприца введите гемоглобин в желудочек, имитируя внутрижелудочковое кровоизлияние.
Извлеките иглу, закройте разрез и дайте щенку восстановиться.
Введенный гемоглобин подвергается деградации, высвобождая гем и образуя активные формы кислорода или АФК.
АФК окисляют липиды и белки клеточных мембран, вызывая гибель клеток и нарушая барьер, что позволяет гему проникать в перивентрикулярное пространство.
Тканевые иммунные клетки распознают свободный гем как сигнал опасности и выделяют провоспалительные цитокины для привлечения дополнительных иммунных клеток, которые повреждают соседние ткани мозга.
Потеря перивентрикулярной ткани приводит к увеличению желудочков, что является следствием внутрижелудочкового кровоизлияния.
Для начала поместите лежащую под наркозом крысу в стереотаксический аппарат, а ее нос будет расположен в адаптере для анестезии. Затем закрепите голову, затянув неразрывные ушные планки на наружном слуховом проходе.
Чтобы очистить голову, сначала прикоснитесь к стерильному аппликатору с ватным наконечником, смоченным в бетадине, в центре головы и двигайтесь наружу, чтобы распределить бетадин по кругу. Затем повторите процесс с аппликатором, смоченным в 70% этаноле.
Далее с помощью скальпеля сделайте разрез 0,3 сантиметра вертикально вниз по центру головы, чтобы обнажить брегму черепа. Затем высушите участок с помощью аппликатора с ватным наконечником.
Чтобы настроить стереотаксический инжектор, наберите приготовленный ранее раствор гемоглобина в шприц объемом 0,3 или 0,5 миллилитра, и поместите шприц в систему стереотаксических инжекторов.
Далее включите интерфейс стереотаксического инжектора и нажмите на кнопку конфигурации, чтобы ввести настройки объема и скорости впрыска. Нажмите на объем и установите объем на уровне 20 000 нанолитров.
Затем нажмите на скорость инфузии и установите скорость на уровне 8000 нанолитров в минуту. Нажмите на кнопку сброса позиции, чтобы выйти из конфигурации. Промойте кончик иглы, нажав кнопку заваривания, пока на кончике иглы не появится небольшая бусинка гемоглобина.
Затем с помощью аппликатора с ватным наконечником аккуратно удалите бусину. Чтобы начать инъекцию животному, установите брегму равной нулю на стереотаксической системе инъекций, регулируя медиолатеральное и переднезаднее положения шприца.
Затем опустите иглу шприца, чтобы осторожно коснуться черепа в месте брегмы. После определения координат выбора поднимите иглу шприца на один сантиметр над черепом, чтобы очистить кожу головы.
Установите медиолатеральные и переднезадние координаты. Затем опустите шприц, чтобы игла мягко коснулась черепа, и установите дорсовентральную координату на 30 секунд.
После того, как координаты будут установлены, начните инъекцию, нажав кнопку RUN в интерфейсе стереотаксического инжектора. После окончания инъекции оставьте иглу на месте на две минуты, чтобы свести к минимуму обратный поток раствора.
Затем медленно извлекайте шприц по дорсовентральной координате в течение двух минут, пока кончик иглы не окажется на два сантиметра выше волосистой части головы. Затем поверните руку стереотаксического инжектора в сторону от операционного поля и закройте кожу головы монофиламентным швом 6-0.