Иммуноокрашивание интернейронов в отделе гиппокампа крысы

Возьмем фиксированный участок гиппокампа крысы, содержащий интернейрон, заполненный биоцитином, молекулой, конъюгированной с биотином.

Затем добавьте раствор, содержащий блокирующие белки и неионогенное моющее средство, чтобы предотвратить неспецифическое связывание и проникнуть в нейроны.

Инкубируйте с первичным антителом, нацеленным на специфические каннабиноидные рецепторы на интернейронах.

Промойте буфером, чтобы удалить излишки антител.

Затем добавьте стрептавидин-конъюгированный флуоресцентный краситель и флуорофор-конъюгированное вторичное антитело.

Во время инкубации стрептавидин прочно связывается с биоцитином, позволяя визуализировать заполненный биоцитином интернейрон, в то время как вторичное антитело нацелено на связанные с рецепторами первичные антитела на интернейронах.

Промойте буфером, удаляя несвязанные молекулы.

Теперь смонтируйте секцию с помощью водного монтажного материала. Установите покровное стекло и запечатайте его.

Используя флуоресцентный микроскоп, визуализируйте заполненный биоцитином интернейрон и экспрессию каннабиноидных рецепторов, что позволяет анализировать морфологию интернейрона и распределение рецепторов.

Заблокируйте ткани 10% блокирующей сыв