Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:19 мин. • July 8th, 2025
Начните с адгезивной культуры зрелых человеческих нейронов в пластине, покрытой матрицей.
Добавьте лентивирусные векторы, кодирующие мутантный человеческий тау-белок, слитый с репортером желтого флуоресцентного белка (YFP).
Лентивирус прикрепляется к специфическим рецепторам поверхности нейрональных клеток, обеспечивая слияние вируса с мембраной хозяина и высвобождение вирусной РНК и ферментов.
Вирусная РНК обратно транскрибируется в ДНК.
Вирусная интеграза транспортирует ДНК в ядро, способствуя интеграции в геном хозяина и приводя к производству мутантного тау-белка, меченного YFP.
Со временем мутантный тау образует цитоплазматические агрегаты в трансдуцированных клетках.
Промойте клетки свежей средой, чтобы удалить неинтернализованные вирусные частицы.
Продолжайте инкубацию с регулярной сменой среды для поддержания жизнеспособности нейронов и стимуляции агрегации белков.
Визуализируйте нейроны под микроскопом.
Успешно трансдуцированные нейроны демонстрируют цитоплазматические агрегаты флуоресцентного мутантного тау-белка, меченного YFP.
Чтобы трансдуцировать нейроны лентивирусом, используйте титр 340 000 транспремируемых единиц на клетку. Развести трансдуктивные единицы в клеточн
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео