Создание модели субарахноидального кровоизлияния у крысы, индуцированного введением аутологичной крови

Возьмем, к примеру, крысу под наркозом с обнаженным черепом и имплантированным зондом для измерения внутричерепного давления.

Используя точку отсчета на черепе, отметьте целевое место и просверлите отверстие.

Удалите костные отломки и заполните отверстие костным воском.

Просверлите еще одно отверстие. Найдите кровеносный сосуд и закрепите зонд для измерения мозгового кровотока.

Возьмите иглу и введите ее в мозг до тех пор, пока череп не будет прощупан.

Слегка втяните, чтобы обеспечить его размещение перед зрительным хиазмой, где расположены крупные кровеносные сосуды.

Заполните игольчатую камеру свежей кровью, взятой из хвоста крысы, и подсоедините шприц с кровью.

Введите кровь в заполненное жидкостью субарахноидальное пространство между наружной и внутренней оболочками мозга, что повышает внутричерепное давление, вызывая сужение кровеносных сосудов.

Это приводит к снижению мозгового кровотока, устанавливая модель субарахноидального кровоизлияния.

Чтобы установить лазерный допплеровский зонд, сделайте 15-миллиметровый разрез каудально по средней линии, начиная прямо перед глазами. После удаления соединительной ткани и мышц с помощью щипцов используйте конец стерильного ватного тампона в качестве режима для определения брегмового и коронкового швов.

После установки вооруженного ретрактора поместите спинальную иглу 25-го калибра в стереотаксическую раму точно на брегму и отметьте положение. Далее извлеките иглу из брегмы. Сдвиньте раму вперед на 6,5 миллиметров, затем установите иглу на среднюю линию, чтобы отметить сторону сверления.

Сверлите до тех пор, пока твердая мозговая оболочка не будет определена ниже кости. С помощью прямых щипцов аккуратно удалите костные отломки, после чего заполните полость костным воском. Далее, на 3-4 миллиметра латеральнее справа от брегмы и прямо перед корональным швом для лазерного допплера, просверлите еще одно отверстие, стараясь не проникнуть в твердую мозговую оболочку.

Ищите сосуды, по которым лазерный допплер может измерить кровоток. Установите лазерный допплер и проверьте значения. Требуется минимальное значение 100 единиц флюса. Если после снятия микроскопа значения остаются приемлемыми, добавьте 1 каплю клея для фиксации щупа. Повторите проверку, чтобы убедиться, что значение превышает 80 единиц потока.

Чтобы вызвать субарахноидальное кровоизлияние, осторожно введите иглу через череп по средней линии между полушариями до тех пор, пока не будет ощущаться сопротивление из-за основания черепа. Втяните иглу на 1 миллиметр, чтобы обеспечить правильное размещение прямо перед хиазмой зрительного нерва. Чтобы обеспечить максимально однородный результат при введении крови, поверните иглу по часовой стрелке на 90 градусов так, чтобы кончик иглы указывал вправо. Затем снимите стилет.

После 15-минутного уравновешивания отрегулируйте уровень анестезии так, чтобы получить среднее артериальное давление в диапазоне от 80 до 100 миллиметров ртутного столба. Затем проведите анализ газов крови, чтобы подтвердить, что pH, парциальное давление углекислого газа и парциальное давление кислорода находятся в пределах физиологических параметров.

Далее с помощью шприца объемом 1 миллилитр с тупой иглой 23 калибра извлеките 500 микролитров крови из хвостового катетера. Чтобы избежать введения воздуха, заполните кровью мертвое пространство камеры спинномозговой иглы. Отрегулировав объем крови в шприце до 300 микролитров, подсоедините шприц к спинномозговой игле. Затем, крепко сжимая шприц, введите кровь вручную, чтобы превысить среднее артериальное давление. Наблюдайте резкое повышение внутримозгового давления и одновременное резкое падение мозгового кровотока.