Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:59 мин. • July 8th, 2025
Начнем с генетически модифицированных человеческих клеток в питательной среде.
Эти клетки содержат тетрациклин-индуцируемую систему, обладающую белком-предшественником амилоида или геном APP и геном люциферазы.
Обменяйте со средой, содержащей тетрациклин и инкубируйте.
Тетрациклин связывается с белком-активатором, который связывается с промотором APP.
Это индуцирует экспрессию генов и производит белки-предшественники, которые локализуются на клеточной мембране.
Фермент β-секретаза расщепляет APP, генерируя фрагмент, который остается прикрепленным к клеточной мембране.
γ-секретаза расщепляет этот фрагмент, продуцируя β амилоидных пептидов и высвобождая активаторный компонент.
Этот активатор проникает в ядро, связывается с промотором люциферазы, индуцирует экспрессию генов и продуцирует ферменты люциферазы.
Замените среду реагентом для анализа, содержащим субстрат люциферазы. Субстрат диффундирует в клетки и вступает в реакцию с люциферазой, производя биолюминесценцию.
Используйте микропланшетный ридер для измерения интенсивности света, которая напрямую отражает активность γ-секретазы, фермента, имеющего решающее значение при невропатологических состояниях.
Подсчитайте НГ или CG клет
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео