Иммуногистохимия для идентификации области locus coeruleus в срезах мозга мыши

Области locus coeruleus, расположенные с обеих сторон в стволе мозга мыши, содержат нейроны, продуцирующие норадреналин, и регулируют различные области мозга.

Чтобы обнаружить эти области locus coeruleus, начните со стеклянного предметного стекла, на котором будут размещены неподвижные, криоконсервированные участки ствола мозга мыши.

Промойте предметное стекло буфером, чтобы удалить фиксирующие следы.

Добавьте буфер, содержащий моющее средство, и инкубируйте для проникновения мембран, затем вымойте.

Введение первичных антител, специфичных к ферменту допамин-β-гидроксилазе, который превращает дофамин в норадреналин, нейромедиатор.

Инкубируйте, чтобы антитела взаимодействовали с дофамин β гидроксилазой.

Промойте, чтобы удалить несвязанные антитела.

Затем добавьте зеленые вторичные антитела, связанные с флуорофорами, и инкубируйте в темноте.

Вторичные антитела связываются с первичными антителами, а затем вымываются.

Добавьте монтажную среду на участки мозга, затем накройте крышкой и высушите.

Понаблюдайте за предметными стеклами под флуоресцентным микроскопом.

Зеленая флуоресценция, представляющая меченые норадреналиновые нейроны в отделах мозга, указывает на наличие областей locus co