Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 6:31 мин. • July 8th, 2025
Соберите медиальную ганглионарную ткань возвышения, содержащую предшественников кортикальных интернейронов, из генетически модифицированных эмбрионов мышей.
Добавьте катионный полимер и диссоциируйте ткань в одноклеточную суспензию.
Добавьте лентивирусные векторы, несущие репортер GFP, зависящий от Cre-рекомбиназы, окруженный сайтами lox. Инкубировать.
Полимер нейтрализует заряды вируса и мембраны клетки-хозяина, обеспечивая слияние вирусов и высвобождение РНК.
Вирусная РНК перезаписывается и интегрируется в геном хозяина.
Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость. Впитывают излишки среды.
Перенесите клетки на гидрофобную поверхность и загрузите их в инъекционное устройство.
Введите клетки в кору головного мозга мышиного щенка, находящегося под наркозом.
Дайте щенку восстановиться и вырасти.
Трансплантированные предшественники дифференцируются в зрелые интернейроны в коре головного мозга.
Подгруппа этих интернейронов совместно экспрессирует Cre-рекомбиназу и RFP.
В этих интернейронах Cre вырезает участки LOX, переворачивая ген GFP и обеспечивая его экспрессию.
Визуализируйте совместную экспрессию RFP и GFP для идентификации интернейронов, экспрессирующих Cre.
После подготов
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео