Матричная модель опухолевой инвазии с использованием кокультуры глиобластомы микроглии

Начните с добавления холодной суспензии глиобластомы и клеток микроглии, каждая из которых окрашена отдельным флуоресцентным красителем, в холодный раствор полимерной матрицы.

Холодное состояние предотвращает преждевременную полимеризацию матрицы.

Затем переложите смесь в пористую камеру, вставьте ее внутрь культуральной пластины.

Инкубируйте для полимеризации матрикса, образуя гель, который встраивает клетки.

Добавьте не содержащую сыворотки среду во вкладыш и питательную среду, содержащую сыворотку, в расположенную ниже лунку, затем инкубируйте.

Химические факторы в сыворотке способствуют миграции клеток в богатые сывороткой среды.

Кроме того, микроглия выделяет сигнальные молекулы, которые взаимодействуют с клетками глиобластомы.

Это усиливает миграцию клеток глиобластомы в нижнюю часть пористого вкладыша, напоминая их миграцию из опухоли в окружающие ткани.

Удалите ячейки с верхней части камеры.

Теперь зафиксируйте оставшиеся ячейки фиксатором и промойте их буфером. Отчетливая флуоресценция клеток помогает отслеживать миграцию клеток.

Разморозьте матричную смесь при четырех градусах Цельсия на ночь. Далее приготовьте концентрацию матрицы 10 мг/мл в соответствующей среде на льду