Изучение трансмиграции лимфоцитов через монослой микрососудистых эндотелиальных клеток

Возьмите микропланшет со вставками transwell, покрытыми белками ECM для стимулирования клеточной адгезии.

Добавьте микрососудистые эндотелиальные клетки головного мозга человека, или HBMEC, во вкладыши и питательную среду в нижние компартменты.

Инкубируют, позволяя клеткам прилипнуть и вырасти в монослой. Эти клетки экспрессируют плотные соединения, имитируя эндотелий гематоэнцефалического барьера, который ограничивает прохождение клеток и молекул.

Удалите среду. Добавьте мононуклеарные клетки периферической крови, или PBMC, во вкладыши и питательную среду в нижние компартменты.

Инкубация, позволяющая лимфоцитам PBMC взаимодействовать с эндотелиальными клетками, а затем проходить между ними, процесс, называемый трансмиграцией.

Промойте дно вкладыша, собирая прилипшие переброшенные клетки в нижние отсеки.

Введите флуоресцентные микрогранулы в качестве эталона для количественного определения клеток.

Перенесите суспензию в пробирку, центрифугу, выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте в коктейле из фторофор-конъюгированных антител, чтобы пометить лимфоциты.

Трансмигрировавшие лимфоциты готовы к количественному определению с помощью проточной цитометрии.

Чтобы подготови