Измерение поглощения дофамина в синаптосомах мозга мышей с помощью радиоактивно меченного дофамина

Собирайте синаптосомы, связанные с мембранами структуры, полученные из неповрежденных пресинаптических окончаний нейронных синапсов, которые содержат транспортеры дофамина (DAT), из мозга мыши.

Пробирки заполнить буфером, содержащим лиганды, и пробирки сравнения с буфером, содержащим лиганды и ингибитор DAT.

Добавьте синаптосомы.

Лиганды ингибируют ферменты, разрушающие дофамин, и другие транспортеры, предотвращая деградацию дофамина и неспецифическое поглощение.

Вводите немеченый и радиоактивно меченный дофамин.

В тестовых условиях синаптосомальный DAT поглощает дофамин.

В референсном состоянии ингибитор предотвращает DAT-опосредованное поглощение дофамина, позволяя только фоновое поглощение.

Добавьте образцы в фильтры из микроволокна, которые удерживают синаптосомы.

Промойтесь, чтобы удалить несвязанный дофамин.

Переложите фильтры в сцинтилляционные трубки.

Добавьте сцинтилляционную жидкость, содержащую радиочувствительное соединение.

Поместите трубки в сцинтилляционный счетчик.

Радиоактивные выбросы дофамина возбуждают соединение излучать свет, который измеряется счетчиком.

Вычтите эталон из тестовых данных, чтобы измерить синаптосомальное поглощение дофамина.

На этом этапе доба