Оценка двигательных нарушений у моделей C. elegans с помощью радиального локомоционного анализа

Возьмем чашки Петри, содержащие равномерное распределение пищи червей на нематодных питательных средах.

Переверните каждую пластину и отметьте центр.

С помощью микроскопа введите червей Caenorhabditis elegans в центрально отмеченное место.

Затем введите червей соответствующего возраста на оставшиеся пластины.

Эти черви экспрессируют либо дикий тип, либо мутантные формы человеческого РНК-связывающего белка, который образует токсичные агрегаты в цитоплазме нейронов и приводит к гибели нейронов.

Это снижает способность червей контролировать движения мышц, что приводит к нарушению двигательной функции.

Дайте червям ползти в течение определенного периода времени.

С помощью микроскопа отметьте конечное местоположение каждого червя.

Измерьте радиальное расстояние, пройденное червями от центрального пятна до их конечного положения.

По сравнению с контрольной группой, черви, экспрессирующие более низкие уровни белка дикого типа, демонстрируют легкие двигательные нарушения, черви с более высокими уровнями белка дикого типа демонстрируют умеренные нарушения, а черви с мутантным белком демонстрируют серьезные нарушения.

Переверните пластины для анализа NGM вверх дном и пометьте дно идентификатором штаммов C. elegans, подлежащих анализу. Сделайте маленькую точку маркером в центре перевернутой тарелки. Во время работы с препарирующим микроскопом перенесите червей в центр пробирной пластины, и установите таймер на 30 минут. Накройте тарелку крышкой, и отложите ее в сторону. Продолжайте перекладывать червей до тех пор, пока все штаммы не окажутся на обозначенных пробирных пластинах.

Через 30 минут начните надрез первой пластины, сняв крышку и поместив пластину лицевой стороной вниз под препарирующий микроскоп. Отрегулируйте фокус микроскопа до тех пор, пока через агар не будут видны все черви. С помощью фломастера другого цвета от центральной точки поставьте маленькую точку в месте расположения каждого червячка.

Проверьте край пластины, так как там могут оказаться черви. Также посчитайте и запишите, сколько червей не переместилось от центральной точки. Измерьте расстояние от центральной точки до отметки конечного местоположения для каждого червя и запишите расстояние с помощью линейки. Первая точка червя отмечена чертем. Записывайте данные о длине для каждой точки последовательно, поворачивая пластину по часовой стрелке.