Гибридизация in situ с использованием олигонуклеотидных зондов для изучения экспрессии РНК в срезах мозга крыс

Возьмите фиксированные участки мозга у крысы с серотониновым синдромом, который приводит к изменению синтеза РНК серотониновых рецепторов в нейронах.

Обезвоживайте ткани с помощью спирта. Применяют раствор предварительной обработки для дезактивации эндогенных гидролизующих ферментов, препятствуя их взаимодействию с реагентами детектирования.

Обработайте кипящим буфером, чтобы разорвать сшивки, вызванные фиксацией, обнажая целевые РНК.

Обезвоживайте ткань, рисуйте гидрофобный барьер и инкубируйте ее с раствором для проникновения клеточных мембран.

Добавьте олигонуклеотидные зонды и инкубируйте, позволяя зондам гибридизоваться с целевыми РНК.

Промойте, чтобы удалить несвязанные зонды, затем инкубируйте с реагентами амплификации, содержащими предусилитель, усилитель и конъюгированные с ферментом зонды-метки, которые связываются с олигонуклеотидными зондами.

Инкубируйте с хромогенными субстратами, которые гидролизуются фермент-конъюгированными зондами, производя видимый цвет.

Обработайте ксилолом для повышения прозрачности тканей, добавьте монтажную среду и наклейте покровное стекло.

Под микроскопом цветные пятна в ткани помогают количественно оценить экспрессию целевой РНК.

В эту проц