Индукция долгосрочной депрессии в нейронах мозжечка Пуркинье в срезе мозга мыши

Начните с мозжечкового среза мозга мыши, содержащего параллельные волокна, восходящие волокна и клетки Пуркинье, необходимые для моторного контроля.

Срез погружают в искусственную спинномозговую жидкость, с записывающим электродом, прикрепленным к ячейке Пуркинье и стимулирующим электродам рядом с параллельными и восходящими волокнами.

Прикладывайте электрические стимулы к параллельным волокнам, вызывая высвобождение глутамата, возбуждающего нейромедиатора рядом с клеткой Пуркинье.

Нейротрансмиттеры связываются с глутаматными рецепторами, что приводит к притоку ионов, которые активируют клетки Пуркинье и генерируют электрический сигнал.

Отрегулируйте интенсивность стимула для оптимального ответа клеток Пуркинье.

Затем проводите повторяющиеся стимуляции лазающих и параллельных волокон.

Стимулы лазающих волокон активируют потенциал-зависимые кальциевые каналы в клетке Пуркинье, вызывая значительный приток кальция.

Это запускает интернализацию глутаматных рецепторов, снижая чувствительность клетки к глутамату.

Это вызывает долгосрочную депрессию, характеризующуюся снижением реакции на стимуляцию параллельных волокон.

Для долгосрочной индукции депрессии стимулируйте молекулярный слой импульсом 0,1 миллисекунды и примените двойной импульсный стимул для идентификации постсинаптических токов с параллельными волокнами. Следует наблюдать парное облегчение пульса и постепенное увеличение амплитуды относительно увеличения интенсивности стимуляции. Чтобы записать реакцию теста, подайте один импульс с частотой 0,1 Гц и отрегулируйте интенсивность стимула таким образом, чтобы вызванная амплитуда составляла около 200 пикоампер.

Стимулируйте лазающие волокна в нижней части слоя клеток Пуркинье, а чтобы идентифицировать постсинаптические токи параллельных волокон, вызванные активацией восходящего волокна, примените двойной импульсный стимул. Парное угнетение пульса должно наблюдаться в полной мере или не должно наблюдаться в зависимости от увеличения интенсивности стимуляции.