Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:41 мин. • July 8th, 2025
Возьмем модель гематоэнцефалического барьера in vitro, состоящую из двух отсеков, разделенных пористой мембраной.
Верхнее или просветное отделение содержит микрососудистые эндотелиальные клетки. Эти клетки экспрессируют плотные соединения, имитируя эндотелий гематоэнцефалического барьера, который ограничивает прохождение клеток и молекул.
Нижнее, или алюминальное, отделение содержит нейроны, астроциты и микроглию, представляющую собой паренхиму мозга.
Введите нейротропный вирус в просветный компартмент для имитации инфекции, передающейся через кровь, и инкубируйте.
Вирус эндоцитозируется эндотелиальными клетками, совершает внутриклеточный транспорт в везикулах и высвобождается на аблюминальной стороне.
После инкубации снимите верхнюю камеру. Образец среды с алюминальной стороны для оценки вирусного количества, подтверждающего успешное просекание эндотелиального слоя.
Добавьте свежую среду и снова инкубируйте.
Вирус проникает в нервные клетки через эндоцитоз, реплицируется и высвобождает вирусное потомство.
Количественно оцените повышенную внеклеточную вирусную нагрузку для подтверждения вирусной нейроинвазии и репликации.
После создания мини-устройства для мозга BBB, как показано на рисунке, добавьте 3500 бляшек-образующих единиц французского нейротропного вируса вируса желтой лихорадки, разведенных в 50 микролитрах 2% среды эндотелиальных клеток FBS очень осторожно в верхнюю часть просветного компартмента. Инокулируйте контрольный мозг BBB mini 50 микролитрами 2% среды эндотелиальных клеток FBS без вируса. Затем поместите подвергшееся воздействию вируса мини-устройство для мозга BBB в инкубатор на 24 часа.
На следующий день удалите вкладыши для определения проницаемости эндотелиальных клеток в лунке-компаньоне, как только что продемонстрировано, и сохраните по 1 миллилитру образца из каждой лунки для определения титра вируса в абуминальном компартменте.
Под вставку аккуратно во избежание протекания просветного отсека в алюминальный.