Иммунофлуоресцентное окрашивание мозга дрозофилы для визуализации глиальных клеток на отдельных клетках

Начнем с мозга трансгенных мух дрозофилы, содержащих различные типы глиальных клеток, несущих клеточно-специфическую систему рекомбиназы.

Он управляет экспрессией белка клеточной поверхности, слитого с различными антигенными эпитопами на клетках одного типа.

Обработайте ткань фиксатором для сшивания белков и сохранения архитектуры ткани.

Вымойте для удаления излишков фиксатора.

Добавьте блокирующие белки для маскировки неспецифических сайтов связывания, чтобы уменьшить фоновое окрашивание.

Инкубируйте ткань с помощью первичного коктейля антител, который связывается с различными эпитопами, экспрессируемыми на глиальных клетках.

Промойте, чтобы удалить несвязанные первичные антитела.

Инкубируйте с флуорофор-конъюгированными вторичными антителами, которые связываются с первичными антителами.

Промойте, чтобы удалить несвязанные вторичные антитела.

Установите мозг внутрь спейсера для визуализации и установите покровную крышку. Спейсер создает камеру для ткани, сохраняя ее трехмерную структуру.

Различные клетки одного и того же глиального типа, меченные различными флуорофор-конъюгированными антителами, позволяют понять межклеточные взаимодействия.

Перенесите изолированный мозг с помощью