Оценка поглощения глюкозы в моторных нейронах личинок дрозофил с повышенным метаболизмом глюкозы

Поместите контрольные и мутантные личинки дрозофилы в отдельные чашки, содержащие буфер, не содержащий глюкозы.

Препарируйте личинок для удаления внутренних органов, обнажая центральную нервную систему или ЦНС.

ЦНС включает в себя вентральный нервный канатик, в котором находятся двигательные нейроны. У мутантных личинок эти нейроны демонстрируют повышенную регуляцию метаболизма глюкозы.

Моторные нейроны в обеих группах экспрессируют внутриклеточные рецепторы глюкозы, содержащие донорные и акцепторные флуорофоры.

Расположите личинок под конфокальным микроскопом. При возбуждении донорский флуорофор испускает флуоресценцию.

Определите местоположение моторных нейронов с помощью этой флуоресценции.

Замените буфер раствором с добавлением глюкозы.

Глюкоза проникает в нейроны, связываясь с сенсорами и вызывая конформационные изменения, которые делают два флуорофора близкими.

При возбуждении акцептор поглощает излучаемую донором энергию, называемую флуоресцентным резонансным переносом энергии или FRET, и излучает флуоресценцию.

Сигнал FRET коррелирует с поглощением глюкозы. Более высокая интенсивность акцепторного сигнала у мутантных личинок по сравнению с контролем указывает на повышенную