Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:46 мин. • July 8th, 2025
Возьмем неподвижный срез ткани мозга мыши, содержащий разреженную популяцию астроцитов, экспрессирующих флуоресцентный белок.
Обработайте свободно плавающий участок буфером, содержащим моющее средство, чтобы проникнуть в клетки.
Инкубируйте секцию в блокирующем буфере, чтобы предотвратить связывание неспецифических антител.
Обработайте срез первичными антителами и инкубируйте, чтобы антитела могли связываться с флуоресцентными белками в астроцитах.
Смойте избыток первичных антител с помощью буфера.
Затем инкубируйте секцию с меченными флуорофорами вторичными антителами, которые связываются с первичными антителами.
Смойте несвязанные вторичные антитела буфером.
Переведите секцию в буферно-деионизированную водную смесь для удаления остатков моющего средства.
Поместите секцию на предметное стекло с буферно-деионизированной водой. Удалите лишнюю жидкость и добавьте монтажный материал. Затем установите покровную крышку и закрепите ее.
Наконец, используйте конфокальную микроскопию для визуализации меченых флуоресцентных астроцитов, экспрессирующих белки, в пределах разреза.
Для начала приготовьте свежий раствор TBST, добавив 1 миллилитр 10% Triton X в 50-миллилитровую тубу и заполнив про
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео