Иммуноокрашивание флуоресцентно меченых астроцитов в срезе ткани мозга мыши

0 просмотров4:46 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмем неподвижный срез ткани мозга мыши, содержащий разреженную популяцию астроцитов, экспрессирующих флуоресцентный белок.

Обработайте свободно плавающий участок буфером, содержащим моющее средство, чтобы проникнуть в клетки.

Инкубируйте секцию в блокирующем буфере, чтобы предотвратить связывание неспецифических антител.

Обработайте срез первичными антителами и инкубируйте, чтобы антитела могли связываться с флуоресцентными белками в астроцитах.

Смойте избыток первичных антител с помощью буфера.

Затем инкубируйте секцию с меченными флуорофорами вторичными антителами, которые связываются с первичными антителами.

Смойте несвязанные вторичные антитела буфером.

Переведите секцию в буферно-деионизированную водную смесь для удаления остатков моющего средства.

Поместите секцию на предметное стекло с буферно-деионизированной водой. Удалите лишнюю жидкость и добавьте монтажный материал. Затем установите покровную крышку и закрепите ее.

Наконец, используйте конфокальную микроскопию для визуализации меченых флуоресцентных астроцитов, экспрессирующих белки, в пределах разреза.

Для начала приготовьте свежий раствор TBST, добавив 1 миллилитр 10% Triton X в 50-миллилитровую тубу и заполнив пробирку до 50 миллилитров TBS. Приготовьте по 2 миллилитра растворов блокирующих и антител для каждого мозга, соединив козью сыворотку и TBST в 15-миллилитровой тубе.

Затем пометьте 24-луночный планшет, чтобы разместить разные образцы в разных рядах, в разных растворах, в разных столбцах. Затем добавьте 1 миллилитр TBST в первые три колонки, помеченные как «Wash 1», «Wash 2» и «Wash 3», и добавьте 1 миллилитр блокирующего раствора в четвертую колонку.

Приготовьте медиатор для стекла, расплавив конец 5,75-дюймовой пипетки Пастера в маленький крючок с помощью горелки Бунзена. Затем перенесите срезы ткани из 12-луночного планшета в столбец «Промывка 1» 24-луночного планшета с помощью медиатора. Затем промойте срезы в течение 10 минут каждый в 1, 2 и 3 лунках, перенося срезы из одной лунки в другую, с помощью медиатора для переноса срезов из одной лунки в другую, а затем инкубируйте срезы в течение одного часа в растворе для блокировки.

Затем инкубируйте срезы первичных антител в течение двух-трех ночей при температуре 4 градуса Цельсия во время встряхивания. После первичной инкубации антител аспирируйте в первый день TBST из промывочных лунок. Затем добавьте 1 миллилитр нового TBST в каждую лунку для стирки и переместите секции в первую лунку для стирки.

Далее инкубируйте срезы во вторичном антителе в течение трех часов при комнатной температуре. После вторичной инкубации антител отсасывайте на второй день TBST из промывочных лунок. Затем добавьте 1 миллилитр нового TBST в каждую лунку для стирки и переместите секции в первую лунку для стирки.

Во время окончательной промывки извлеките монтажный материал из температуры от 4 градусов Цельсия и дайте ему нагреться до комнатной температуры. Затем приготовьте смесь TBS в соотношении 2 к 1 в деионизированной воде и добавьте ее в чашку Петри. Далее приготовьте предметное стекло микроскопа, добавив на поверхность 800 микролитров смеси 2 к 1 TBS в деионизированной воде.

Переложите срезы из лунки «Wash 3» в чашку Петри. Затем с помощью тонкой кисти переложите секции по одному из чашки Петри в жидкость на предметном стекле. Далее аккуратно расположите секции так, чтобы они были ровно на предметном стекле с помощью кисти. Осторожно удалите лишнюю жидкость с предметного стекла с помощью пипетки P1000 с последующей вакуумной аспирацией.

После того, как вся лишняя жидкость будет удалена с предметного стекла, с помощью переводной пипетки немедленно добавьте по одной капле монтажного материала в каждую секцию и аккуратно наложите покровное стекло на предметное стекло. Дайте монтажному материалу распределиться в течение нескольких минут, а затем удалите излишки монтажного материала, выходящие из-под защитного стекла, с помощью вакуумной аспирации. После этого заклейте все четыре края покровного стекла прозрачным лаком для ногтей.

09:11

Иммуногистохимического анализа в нервной системе крыс центральной и периферической ткани лимфатического узла Разделы

Похожие видео

0 Просмотры

06:45

Гистологические окрашивания с использованием свободно плавающих участков тканей

Похожие видео

0 Просмотры

07:58

Свободно плавающее иммуноокрашание мозга мыши

Похожие видео

0 Просмотры

03:59

Иммунофлуоресцентное окрашивание для визуализации пролиферировавших нейральных стволовых клеток в срезах мозга мышей

Похожие видео

0 Просмотры

02:19

Иммуномечение белков нейрональных мембран в сублимационном образце ткани мозга мыши

Похожие видео

0 Просмотры

03:04

Иммуноокрашивание нейронов в срезах мозга мышей после флуоресцентной гибридизации in situ

Похожие видео

0 Просмотры

04:19

Визуализация морфологии астроцитов с помощью флуоресцентного ионофореза красителя в неподвижном срезе мозга мыши

Похожие видео

0 Просмотры

03:16

Трехмерная визуализация иммуномеченых астроцитов с помощью конфокальной микроскопии

Похожие видео

0 Просмотры

07:30

Грунтовка для иммуногистохимии Cryosectioned ткани мозга крыс: Пример окрашивания для микроглии и нейронов

Похожие видео

0 Просмотры

10:40

Иммунофлуоресценция пятно использованием IBA1 и TMEM119 для микроглиальной плотности, морфологии и периферической миелоидной клеточной инфильтрации анализа в мышиный мозг

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 15 августа 2026