Создание модели культуры органов для моделирования заболевания межпозвоночных дисков на ранних стадиях

Возьмем межпозвоночный диск (МВД), подушкообразную структуру, расположенную между позвонками, из бычьего хвоста.

Расположите его вертикально и введите рекомбинантный TNF-α, провоспалительный цитокин, в пульпозное ядро (NP), гелеобразное ядро.

Извлеките шприц наполовину и потяните поршень, чтобы создать вакуум, предотвращающий обратный поток TNF-α. Затем извлеките шприц.

Поместите ИВД в камеру биореактора, содержащую среду, и ежедневно применяйте интенсивную нагрузку давлением.

TNF-α связывается со своими рецепторами на NP-клетках, запуская сигнальный каскад.

Это активирует инициировательные и исполнительные каспазы, которые разрушают клеточные белки и индуцируют апоптоз.

TNF-α также активирует фактор транскрипции NF-κB, который индуцирует экспрессию воспалительных генов, что приводит к высвобождению ферментов, разрушающих внеклеточный матрикс IVD.

Кроме того, интенсивная нагрузка давлением вызывает механическое напряжение, что еще больше ухудшает состояние IVD.

Это уменьшает рост IVD по сравнению с контрольной группой, не получающей лечения, создавая дегенеративную и провоспалительную модель ранней стадии заболевания IVD.

После первого цикла динамической нагрузки в первый день поместите IVD непосредственно в чашку Петри в вертикальном положении и стабилизируйте их с помощью пинцета. Вводите рекомбинантный ФНО альфа с помощью иглы инсулина 30-го калибра, медленно со скоростью примерно 70 микролитров в минуту в ИВД патологической группы. После инъекции оттяните шприц наполовину назад и потяните поршень, чтобы создать вакуум, предотвращающий утечку введенного раствора. Затем полностью извлеките шприц из IVD.