Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:55 мин. • July 8th, 2025
Разморозьте участок замороженной ткани мозга крысы.
Добавьте буфер и пропустите через мясорубку. Затем переложите его в пробирку с буфером и перемешайте.
Центрифугируйте смесь и выбросьте надосадочную жидкость.
Добавьте в ткань раствор протеолитического фермента и ресуспендируйте его с помощью пипетки большого диаметра.
Инкубируйте смесь, чтобы разрушить внеклеточный матрикс, разрыхлив нервные клетки.
Центрифугируйте смесь и выбросьте надосадочную жидкость.
Ресуспендируйте фрагменты ткани в охлажденном буфере и многократно пипетируйте их, чтобы диссоциировать клетки.
Дайте мусору и недиссоциированным клеткам осесть, затем перенесите одноклеточную суспензию в новую трубку.
Переведите ячейки в ледяной этанол и перемешайте. Инкубируйте их, чтобы закрепить и пропитать клетки.
Центрифугируйте суспензию и выбросьте надосадочную жидкость.
Ресуспендируйте нервные клетки в холодном буфере для дальнейшего анализа.
Чтобы измельчить ткань, дайте образцам оттаять на холодной стеклянной пластине не более чем на 1 минуту, прежде чем покрыть образцы одной-двумя каплями буферного раствора А. Далее, держа лезвие бритвы полностью вертикально к пластине, измельчите ткань по 100 раз в каждом ортогональ
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео