Оценка состояния пальмитоилирования белков клеточных мембран из ткани мозга мыши

Возьмите белки клеточных мембран из ткани мозга мыши.

Эти белки демонстрируют посттрансляционную модификацию пальмитоильными группами, жирной кислотой, присоединенной к остаткам цистеина.

Добавьте восстановительный буфер и инкубируйте при высокой температуре, чтобы разорвать связи между цистеинами, не относящимися к пальмитоилированию, обнажив их.

Инкубируйте с блокирующим реагентом, который связывается с подвергшимися воздействию цистеинами, оставляя реактивными только пальмитоилированные цистеины.

Перелейте раствор, смешайте его с хлороформом, метанолом и деионизированной водой, центрифугой, чтобы высадить белки в осадке и удалить любые примеси. Затем добавьте метанол, центрифугу и выбросьте все оставшиеся загрязнения.

Добавьте буфер, ультразвук для растворения гранулы, затем центрифугируйте и удалите нерастворимые материалы.

Нанесите расщепляющий реагент для удаления пальмитоильных групп из пальмитоилированных цистеинов.

Повторите выпадение хлороформа-метанола и удалите любые примеси.

Инкубируйте с полимером, который связывается с незаблокированными цистеинами, помогая идентифицировать пальмитоилированные белки.

Повторите осаждение хлороформа-метанола и удалите все несвязанные п