Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:08 мин. • July 8th, 2025
Возьмем стенку тела личинки дрозофилы, состоящую из мышц, иннервируемых двигательными нейронами для формирования нервно-мышечных соединений или NMJ.
Постсинаптическая мышечная мембрана в NMJ содержит взаимодействующие мембраносвязанные белки, которые помечены первичными антителами.
Добавьте анализ бесконтактного лигирования, или PLA, зонды, содержащие вторичные антитела, конъюгированные с одноцепочечными олигонуклеотидами. Инкубируйте зонды, чтобы они связались с первичными антителами.
Смойте все незакрепленные щупы.
Инкубировать с буфером для лигирования, содержащим соединительные олигонуклеотиды и ферменты лигазы.
Близость взаимодействующих белков облегчает связывание соединителя с зондами. Затем лигаза запечатывает пробелы, создавая кольцевую ДНК.
Смойте все незавязанные разъемы.
Инкубируйте с раствором для амплификации, содержащим полимеразу, которая амплифицирует кольцевую ДНК за счет амплификации по вращающемуся кругу.
Меченные флуорофорами детекторные зонды в растворе отжигают амплифицированную ДНК и при возбуждении производят флуоресцентный сигнал.
Установите стенку тела на предметное стекло, чтобы визуализировать флуоресцентно меченые белок-белковые взаимодействия в NMJ.
Ч
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео