Обнаружение модификаций гистонов в дрожжевых клетках с гиперэкспрессией нейродегенеративных белков

Начните с суспензии дрожжевых клеток, сверхэкспрессирующих белки, связанные с нейродегенеративными заболеваниями.

Этот сверхэкспрессированный белок отвечает за модификации белков, упаковывающих ДНК, или гистонов с химическими фрагментами.

Добавьте гидроксид натрия и бета-меркаптоэтанол, а затем инкубируйте на льду.

Гидроксид натрия и бета-меркаптоэтанол лизируют клетки, высвобождая внутриклеточные белки, включая гистоны.

Центрифугируйте лизат для сбора белков. Выбросьте надосадочную жидкость.

Добавьте краситель для загрузки в белковые гранулы и нагрейте их, чтобы денатурировать их.

Загрузите эти денатурированные белки и белковый маркер на гель и электрофоризируйте, чтобы разделить их по размеру.

Электропереносите белки на мембрану, промойте и добавьте блокирующий буфер для предотвращения неспецифического связывания.

Добавьте первичные антитела, которые специфически связываются с модифицированными гистонами.

Промойте для удаления несвязанных антител и инкубируйте с флуоресцентными вторичными антителами, которые связываются с первичными антителами.

Отчетливая флуоресцентная полоса подтверждает модификации гистонов, указывая на сверхэкспрессию нейродегенеративных белков.

Чтобы лизировать клетк