Создание трехмерной сфероидальной модели инвазии опухолевых клеток

Возьмите культуру клеток опухоли человеческого мозга.

Обработайте ферментом диссоциации, чтобы разрушить клеточные соединения, разделяя агрегированные клетки.

Промойте буфером, чтобы остановить активность фермента, затем добавьте питательную среду для поддержания жизнеспособности клеток.

Введите метилцеллюлозу, суспензирующий агент.

Перенесите суспензию в микропластину с круглым дном и инкубируйте.

Вязкая метилцеллюлоза поддерживает клетки во взвешенном состоянии, способствуя межклеточному взаимодействию для агрегации в сфероиды.

Смешайте сфероиды с коллагеновой матрицей, которая имитирует физиологическую внеклеточную среду.

Перенесите суспензию в микропланшет и инкубируйте, позволяя матрице сформировать гель, который захватывает сфероиды.

Добавьте питательную среду поверх геля.

На периферии сфероида опухолевые клетки теряют межклеточную адгезию и принимают инвазивный фенотип.

Эти клетки выделяют протеазы, чтобы разрушить матрицу, расширить выступы, чтобы закрепиться, и двигаться вперед, вторгаясь в матрицу.

Модель сфероида, демонстрирующая инвазию опухоли, готова к анализу.

Чтобы получить опухолевые сфероиды одинакового размера, сначала промойте интересующую культуру опухолевых клеток 5 милл