Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:42 мин. • April 28th, 2025
Начните с мыши, находящейся под наркозом, с обнаженной общей сонной артерией или CCA.
CCA разветвляется на наружную сонную артерию, или ECA, снабжающую кровью лицо, и внутреннюю сонную артерию, или ICA, снабжающую кровью мозг.
Сначала наложите шов вокруг ECA и затяните его.
Затем добавьте тугой шов на CCA ниже места инъекции, чтобы блокировать кровоток.
Вставьте влажную бумажную полоску под CCA для поддержки.
Поместите свободный узел над местом инъекции, затем введите раковые клетки в CCA.
Из-за сшитого ECA клетки отправляются в ICA, чтобы достичь мозга.
После инъекции удалите иглу и затяните дистальный узел CCA, чтобы предотвратить обратный поток.
Наконец, обрежьте швы, снимите полоску, промойте физиологическим раствором и закройте рану.
Со временем мигрировавшие раковые клетки размножаются и развивают опухоли в мозге.
Расположите тонкие щипцы под наружной сонной артерией и проведите шелковый шов 5-0 под артерией. Завяжите узел и затяните шов и отрежьте лишнюю леску. Расположите тонкие щипцы под общей сонной артерией и проведите шелковый шов 5-0 под артерией.
Завяжите узел и затяните шов в месте, близком к предполагаемому месту инъекции. Разрежьте лишний шов, оставив около 10 миллиметра линии. Нарежьте и смочите полоску низковорсовых одноразовых салфеток примерно 10 на 5 миллиметров.
Сложите полоску и поместите ее под сонную артерию в предполагаемом месте инъекции. Это будет поддерживать сосуд во время инъекции. На общую сонную артерию рострально к предполагаемому месту инъекции поставьте третью лигацию с рыхлым узлом. Это подтягивается только после инъекции.
Осторожно перемешайте клеточную суспензию и наберите 200 микролитров клеточной суспензии в инсулиновый шприц с помощью иглы 31 калибра. Загрузите шприц в драйвер шприца, подключенный к активирующей ножной педали.
Прикрепите к шприцу тонкую канюлю с иглой 31 калибра и загрунтуйте линию. Проверьте, правильно ли расположена сонная артерия и находится ли она под давлением. Используя два щипца под тонким углом, один из которых мягко натягивается на конец первой лигатуры, а другой держит иглу 31 калибра, медленно введите иглу скошенным вверх в просвет кровеносного сосуда, стараясь не проколоть его.
Медленно вводите 100 микролитров клеточной суспензии, приготовленной ранее, в общую сонную артерию со скоростью 10 микролитров в секунду. Это позволит доставить в кровеносный сосуд от 2,5 до 10 до пятой клетки. Успешная инъекция может быть визуализирована путем очистки крови из сонного кровеносного сосуда.
Аккуратно поднимите и затяните ослабленную лигатуру сразу после извлечения иглы, чтобы предотвратить обратный поток и кровотечение. Обрежьте лишние швы и удалите кусок увлажненных одноразовых салфеток с низким ворсом.
Используя пипетку P200, дважды промойте хирургическую полость от 150 до 200 микролитров стерильной воды или физиологического раствора. После проверки на наличие кровотечений переместите мягкие ткани, слюнные железы и кожу над сонной артерией и трахеей. Закройте слой кожи разреза с помощью иглодержателя для наложения швов, щипцов и рассасывающегося или нерассасывающегося шовного материала из мононити 6-0 непрерывным способом.