Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:38 мин. • April 28th, 2025
Возьмите сфероиды нейроэндокринных опухолей тонкой кишки в пробирке.
Добавьте фиксативный раствор для сохранения клеток.
Чтобы промыть, центрифугировать и заменить фиксатор на буфер.
Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость, чтобы удалить остатки фиксатора.
Добавьте буфер, содержащий моющее средство и блокирующий агент, чтобы проникнуть в клеточные мембраны и предотвратить связывание неспецифических антител.
Постирайте с буфером, чтобы удалить излишки моющего средства и блокирующего средства.
Инкубируйте с первичными антителами, которые связываются с белком-мишенью, специфичным для нейроэндокринной клетки.
Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.
Добавьте помеченные флуорофором вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами.
Промойте буфером для удаления избытка антител.
Добавьте монтажную среду, содержащую краситель для окрашивания ядра.
Перенесите сфероиды на слайд и закрепите с помощью защитного стекла.
Используйте флуоресцентный микроскоп для визуализации нейроэндокринных клеток сфероида, экспрессирующих специфические белки.
Исправьте органоиды, добавив 500 микролитров параформальдегида и инкубируя их в течение 15 минут. После инкубации дважды промой
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео