Измерение скорости потребления кислорода в острых срезах мозга мышей

Поместите удары по срезам мозга здоровых и нейродегенеративных мышей на экраны для хранения образцов.

Переверните экраны и вставьте их в тканевую пластину.

Возьмите предварительно откалиброванный картридж с датчиками. Загрузите соединения — пируват, олигомицин, FCCP и антимицин А — в отверстия для инъекций.

Поместите картридж на тканевую пластину. Запустите прогон с помощью анализатора внеклеточного потока.

Зонды измеряют скорость потребления кислорода срезом или (OCR).

При первой инъекции пируват попадает в митохондрии, генерируя переносчики электронов.

Эти переносчики отдают электроны в комплексы I и II цепи переноса электронов (ETC), инициируя реакцию переноса электронов, которая увеличивает потребление кислорода и OCR.

Олигомицин ингибирует комплекс V, останавливая синтез АТФ и снижая OCR.

FCCP, протонофор, нарушает протонный градиент, увеличивая потребление кислорода и OCR.

Антимицин А связывается с комплексом III и останавливает ETC, сводя к минимуму OCR.

Сравните профили OCR.

Снижение OCR в нейродегенеративных срезах указывает на митохондриальное нарушение.

Отсосите один кусочек пробитой мозговой ткани и осторожно поместите ткань на сетчатую сторону экрана захвата. Круглый кусок пласт