Анализ фагоцитоза живых клеток микроглиеподобных клеток с использованием синаптосом человека

0 просмотров3:28 мин • April 28th, 2025

Возьмем многолуночную пластину, содержащую микроглиеподобные клетки, проявляющие фагоцитарную активность.

Инкубируйте с ядерным красителем, чтобы пометить ядра.

Добавьте ингибитор полимеризации актина в лунку отрицательного контроля.

Во время инкубации ингибитор связывается с актиновыми филаментами, ингибируя полимеризацию актина и фагоцитоз.

Поддерживайте пластину при низких температурах и добавляйте pH-чувствительные к красителю человеческие синаптосомы - изолированные фрагменты нейронных синаптических окончаний.

Центрифугируйте планшет при низких температурах, чтобы стимулировать взаимодействие между клеткой и синаптосомой, но предотвратить преждевременное поглощение.

Перенесите пластину в систему визуализации живых клеток.

В тестовом колодце синаптосомы фагоцитируются и сливаются с лизосомами, образуя фаголизосомы. Лизосомальная кислая среда активирует краситель, в результате чего происходит его флуоресценция.

Со временем, в тестовом колодце, поглощается больше синаптосом, что приводит к дальнейшему увеличению флуоресценции.

Однако в отрицательном контрольном колодце полимеризация актина подавляется, препятствуя поглощению синаптосом. Полученная минимальная флуоресценция подтверждает зависимость флуоресценции от актин-опосредованного фагоцитоза.

В день анализа удалите 40 микролитров среды на лунку и добавьте 10 микролитров раствора ядерного окрашивания. Выдержите тарелку в течение двух часов. Разморозьте помеченные синаптосомы на льду и аккуратно обрабатывайте ультразвуком с помощью водного ультразвука в течение одной минуты. Опять же, сразу же поместите синаптосомы на лед. Разбавьте меченые синаптосомы и полную среду IMG из расчета 1 микролитр синаптосом на 50 микролитров среды.

Для отрицательного контроля приготовьте 60 микромолярного цитохалазина D в полной среде IMG, чтобы ингибировать полимеризацию актина и, таким образом, фагоцитоз. Затем добавьте по 10 микролитров этого раствора в каждую лунку для окончательной концентрации 10 микромоляров и выдерживайте в течение 30 минут. Достаньте тарелку из инкубатора и инкубируйте при температуре 10 градусов Цельсия в течение 10 минут. Держите тарелку на льду и добавьте 50 микролитров среды, содержащей синаптосомы.

Центрифугируйте пластину при температуре 270 раз g в течение трех минут при температуре 10 градусов Цельсия и держите пластину на льду до получения изображения. Вставьте планшет в считыватель изображений живых клеток и выберите лунки для анализа. Затем выберите объектив с 20-кратным увеличением. Затем отрегулируйте интенсивность светодиода фокусировки или светодиода, время интеграции и усиление яркого поля и синих каналов. Флуоресценция синаптосомы должна быть пренебрежимо малой в начальный момент времени.

Выберите количество отдельных плиток, которые будут получены в монтаже для каждой лунки. Получите 16 плиток в центре скважины, визуализируя примерно 5% от общей площади скважины. Установите температуру на 37 градусов Цельсия и желаемый временной интервал для визуализации.

06:43

Роман В Vitro Live изображений Assay экзоцитоз-опосредованной с помощью фагоцитоза pH индикатор конъюгированных синаптосомах

Похожие видео

0 Просмотры

09:48

Количественный анализ визуализации in vitro для фагоцитоза мертвых клеток нейробластомы iPSC-макрофагами

Похожие видео

0 Просмотры

09:10

Мезенхимальная регуляция стволовых клеток макрофагального фагоцитоза; Количественное и визуализация

Похожие видео

0 Просмотры

10:20

Первичная изоляция Микроглия из смешанного глиальных клеточных культур из тканей новорожденных мозга крысы

Похожие видео

0 Просмотры

06:23

Анализ микроглиального фагоцитоза: анализ in vitro для создания модели микроглиального фагоцитоза для клеток нейробластомы с использованием макрофагов iPSC

Похожие видео

0 Просмотры

03:33

Анализ фагоцитоза in vitro: метод на основе визуализации в реальном времени для изучения фагоцитоза синаптосомы астроцитов, опосредованного астроцитами

Похожие видео

0 Просмотры

04:03

Дифференцировка индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток в клетки, подобные микроглии

Похожие видео

0 Просмотры

07:38

Охвате Анализ: Протокол для оценки взаимодействия между ЦНС фагоцитов и нейронов

Похожие видео

0 Просмотры

07:19

Оценка сетчатке микроглии фагоцитарной функции

Похожие видео

0 Просмотры

11:19

Человеческие микроглиоподобные клетки: дифференциация из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток и анализ фагоцитоза живых клеток in vitro с использованием синаптосом человека

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 29 августа 2026