Анализ фагоцитоза живых клеток микроглиеподобных клеток с использованием синаптосом человека

Возьмем многолуночную пластину, содержащую микроглиеподобные клетки, проявляющие фагоцитарную активность.

Инкубируйте с ядерным красителем, чтобы пометить ядра.

Добавьте ингибитор полимеризации актина в лунку отрицательного контроля.

Во время инкубации ингибитор связывается с актиновыми филаментами, ингибируя полимеризацию актина и фагоцитоз.

Поддерживайте пластину при низких температурах и добавляйте pH-чувствительные к красителю человеческие синаптосомы - изолированные фрагменты нейронных синаптических окончаний.

Центрифугируйте планшет при низких температурах, чтобы стимулировать взаимодействие между клеткой и синаптосомой, но предотвратить преждевременное поглощение.

Перенесите пластину в систему визуализации живых клеток.

В тестовом колодце синаптосомы фагоцитируются и сливаются с лизосомами, образуя фаголизосомы. Лизосомальная кислая среда активирует краситель, в результате чего происходит его флуоресценция.

Со временем, в тестовом колодце, поглощается больше синаптосом, что приводит к дальнейшему увеличению флуоресценции.

Однако в отрицательном контрольном колодце полимеризация актина подавляется, препятствуя поглощению синаптосом. Полученная минимальная флуоресценция подтверждает за