Количественная оценка сомах ганглиозных клеток сетчатки после глазной гипертензии, вызванной прижиганием

0 просмотров3:06 мин • April 28th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмем химически фиксированную сетчатку, изолированную от глаза крысы.

Глаз демонстрирует вызванное теплом повреждение лимбального сосудистого сплетения, сети кровеносных сосудов, окружающих роговицу.

Это повреждение блокирует дренаж жидкости, увеличивая внутриглазное давление (ВГД) и вызывая дегенерацию ганглиозных клеток сетчатки (RGC).

Обработайте сетчатку раствором для проникновения клеток и ядерных мембран.

Примените блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител.

Удалите решение для блокировки.

Введите первичные антитела, которые нацелены на транскрипционный фактор, преимущественно экспрессируемый в RGC.

Промойте для удаления несвязанных антител.

Введите флуорофор-конъюгированные вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами.

Промойте для удаления несвязанных антител.

Покрасьте ядра ДНК-связывающим красителем.

Промойте сетчатку и закрепите ее на предметном стекле с помощью подходящей среды для крепления.

Визуализируйте сетчатку под эпифлуоресцентным микроскопом.

Сниженная плотность клеток в поврежденном глазу по сравнению с контролем подтверждает дегенерацию RGC из-за повышенного IOP.

После изоляции сетчатки перенесите их в 24-луночный планшет для культуры, содержащий 1 миллилитр PBS, держа внутреннюю сетчатку обращенной вверх. Промывайте ткань 0,5% неионогенным поверхностно-активным веществом, разведенным в PBS. Затем инкубируйте ткань в блокирующем растворе в течение одного часа при комнатной температуре с легким встряхиванием. Во время инкубации приготовьте первичный раствор антитела BRM 3A и храните при температуре 4 градуса Цельсия.

После блокировки тканей инкубируйте сетчатку в 200 микролитрах первичного раствора антител при температуре 4 градуса Цельсия в течение 72 часов с легким встряхиванием. Далее промойте салфетку с помощью PBS. Инкубировать ткань в 200 микролитрах раствора вторичного антитела в течение двух часов при комнатной температуре, а затем с раствором ядерного контрокрашивания в течение 10 минут для окрашивания флуоресцентных ядер.

После трех промываний PBS перенесите сетчатку на предметное стекло микроскопа с помощью двух маленьких кистей, сохраняя стекловидную сторону вверх. Расположите дорсальный квадрант сетчатки вверх на предметном стекле микроскопа. Наконец, нанесите 200 микролитров защитной среды на стеклянную защитную крышку и поместите ее на плоскую сетчатку для микроскопического анализа. Под конфокальным эпифлуоресцентным микроскопом с использованием объектива с 40-кратным увеличением исследуйте плоские крепления, чтобы оценить ганглиозные клетки сетчатки.

06:35

Экспериментальная Глаукома индуцированная глазной инъекций магнитных микросфер

Похожие видео

0 Просмотры

09:26

Магнитный Microbead окклюзия Модель для индуцируют офтальмогипертензией-зависимых Глаукома у мышей

Похожие видео

0 Просмотры

07:00

Модель глаукомы, индуцированных Circumlimbal шва у крыс и мышей

Похожие видео

0 Просмотры

12:06

Оптические Перерезка Нервные: Модель взрослых апоптоза нейронов в центральной нервной системе

Похожие видео

0 Просмотры

09:07

Зрительный нерв размозжение мышиной моделью для изучения сетчатки выживания клеток ганглия

Похожие видео

0 Просмотры

03:04

Индукция повышенного внутриглазного давления у модели крысы

Похожие видео

0 Просмотры

08:30

Глаукома индуцирующего процедуры в

Похожие видео

0 Просмотры

13:12

Перерезка частичное зрительного нерва у крыс: модель с новой постановляющей части подход к оценке вторичной дегенерации сетчатки ганглия клеток

Похожие видео

0 Просмотры

09:03

Реверсивные Силиконового масла индуцированной глазной гипертензии Модель у мышей

Похожие видео

0 Просмотры

12:28

Количественная оценка сосудистых параметров у целых сетчаток мышей с непролиферативными и пролиферативными ретинопатиями

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 22 августа 2026