Количественная оценка сомах ганглиозных клеток сетчатки после глазной гипертензии, вызванной прижиганием

Возьмем химически фиксированную сетчатку, изолированную от глаза крысы.

Глаз демонстрирует вызванное теплом повреждение лимбального сосудистого сплетения, сети кровеносных сосудов, окружающих роговицу.

Это повреждение блокирует дренаж жидкости, увеличивая внутриглазное давление (ВГД) и вызывая дегенерацию ганглиозных клеток сетчатки (RGC).

Обработайте сетчатку раствором для проникновения клеток и ядерных мембран.

Примените блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител.

Удалите решение для блокировки.

Введите первичные антитела, которые нацелены на транскрипционный фактор, преимущественно экспрессируемый в RGC.

Промойте для удаления несвязанных антител.

Введите флуорофор-конъюгированные вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами.

Промойте для удаления несвязанных антител.

Покрасьте ядра ДНК-связывающим красителем.

Промойте сетчатку и закрепите ее на предметном стекле с помощью подходящей среды для крепления.

Визуализируйте сетчатку под эпифлуоресцентным микроскопом.

Сниженная плотность клеток в поврежденном глазу по сравнению с контролем подтверждает дегенерацию RGC из-за повышенного IOP.

После изоляции сетчатки перенесите их в 24-луночный планшет